[发明专利]一种重组转氨酶和所述重组转氨酶的突变体及其应用有效
申请号: | 202011280191.3 | 申请日: | 2020-11-16 |
公开(公告)号: | CN112280761B | 公开(公告)日: | 2022-04-12 |
发明(设计)人: | 于慧敏;李付龙;梁有向;郑煜堃;魏宇文 | 申请(专利权)人: | 清华大学 |
主分类号: | C12N9/10 | 分类号: | C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21;C12P13/00;C12R1/19 |
代理公司: | 北京林达刘知识产权代理事务所(普通合伙) 11277 | 代理人: | 刘新宇;李茂家 |
地址: | 100084*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 重组 转氨酶 突变体 及其 应用 | ||
1.一种转氨酶突变体,其特征在于,所述转氨酶突变体的氨基酸序列是由SEQ ID NO:2所示的野生型氨基酸序列发生突变得到的氨基酸序列,所述突变方式为Y125A、Y125T、Y70F/Y125A、Y70V/Y125A、Y70T/Y125A、Y70A/Y125V、Y70T/V72A/Y125F、Y70A/V72T/Y125V、Y70V/V72T/Y125V、Y70F/V72T/Y125V、Y70F/V72A/Y125V、Y70T/V72A/Y125V或Y70T/V72A/Y125A中的任意一种。
2.据权利要求1所述的转氨酶突变体,其特征在于,所述突变方式为Y70T/V72A/Y125A。
3.根据权利要求2所述的转氨酶突变体,其特征在于,所述转氨酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。
4.一种编码权利要求2或3中所述转氨酶突变体的基因,其特征在于,所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。
5.一种重组表达载体,其特征在于,所述重组表达载体包含权利要求4所述的基因。
6.根据权利要求5所述的重组表达载体,其特征在于,所述重组表达载体包括pET系列载体、穿梭载体、噬菌体或病毒载体。
7.根据权利要求5所述的重组表达载体,其特征在于,所述重组表达载体为pET-28a。
8.一种重组宿主细胞,其特征在于,所述宿主细胞包含权利要求5至7中任一项所述的重组表达载体。
9.根据权利要求8所述的重组宿主细胞,其特征在于,所述宿主细胞为原核细胞、酵母或真核细胞。
10.根据权利要求8所述的重组宿主细胞,其特征在于,所述宿主细胞为大肠杆菌BL21(DE3)。
11.一种酶制剂,其特征在于,所述酶制剂包括权利要求1或2所述的转氨酶突变体。
12.一种如权利要求1或2所述的转氨酶突变体在催化羟基酮和潜手性酮类化合物发生转氨反应制备手性氨基醇及手性胺中的用途,其特征在于,所述羟基酮和潜手性酮类化合物为:4-羟基-2-丁酮、1-羟基-2-丁酮、羟基丙酮、1-甲氧基-2-丙酮、2-戊酮、2-己酮、2-庚酮、4-甲基-2-戊酮、5-甲基-2-己酮、苯乙酮、2-羟基苯乙酮、2-环己烯-1-酮、2-甲基环己酮、3-甲基环己酮、1-茚酮、1-四氢萘酮和N-叔丁氧羰基-3-哌啶酮;所述手性氨基醇及手性胺为:(R)-3-氨基丁醇、(R)-2-氨基丁醇、(R)-丙氨醇、(R)-1-甲氧基-2-丙胺、(R)-2-戊胺、(R)-2-己胺、
(R)-2-庚胺、(R)-1,3-二甲基丁胺、(R)-1,4-二甲基戊胺、(R)-苯乙胺、
(S)-苯甘氨醇、(R)-2-环己烯-1-胺、trans-2-甲基环已胺、trans-3-甲基环已胺、(R)-(-)-1-氨基茚满、(R)-(+)-1,2,3,4-四氢萘胺、(R)-1-叔丁氧羰基-3-氨基哌啶。
13.根据权利要求12所述的用途,其特征在于,所述羟基酮和潜手性酮类化合物为2-环己烯-1-酮、2-甲基环己酮、3-甲基环己酮、1-茚酮、1-四氢萘酮和N-叔丁氧羰基-3-哌啶酮;所述手性氨基醇及手性胺为(R)-2-环己烯-1-胺、trans-2-甲基环已胺、trans-3-甲基环已胺、(R)-(-)-1-氨基茚满、(R)-(+)-1,2,3,4-四氢萘胺和(R)-1-叔丁氧羰基-3-氨基哌啶。
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