[发明专利]一种基于核酸滚环扩增反应的同时检测多种生物标志物的试剂盒

说明书

本发明提供了一种基于核酸滚环扩增反应的同时检测多种生物标志物的试剂盒，涉及标志物检测技术领域。本发明所述试剂盒中包含四种独立的成分：标记单链脱氧核糖核酸的特异性抗体溶液；包被所述生物标志物的特异性抗体的磁珠悬浊液；含有环状脱氧核糖核酸的反应液；含有不同探针的反应液。本发明所述试剂盒进行多种标志物的检测时，与雅培化学发光检测结果相近，甚至在足够时间内能够检测到更低的浓度(ag/ml)，灵敏度明显优于化学发光检测方法；如在检测心血管疾病生物标志物如：心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌红蛋白(Myo)和肌酸激酶同工酶(CKMB)时，在一个反应杯中同时完成三项指标的检测，且互相不干扰结果。

技术领域

本发明属于标志物检测技术领域，具体涉及一种基于核酸滚环扩增反应 的同时检测多种生物标志物的试剂盒。

背景技术

免疫检测技术是目前最常用且最经典的检测技术之一，其主要特点是： 利用抗体和抗原的特异性识别相互结合发生免疫结合反应。根据标志物的不 同，主要有放射免疫检测技术、酶联免疫吸附检测技术、胶乳增强免疫比浊 检测技术、免疫层析检测技术和化学发光检测技术。放射免疫检测技术是基 于用放射性核素作为标记物标记抗原或抗体所进行的抗原抗体反应，放射免疫技术需特殊仪器设备且有一定的放射性危害，并没有广泛应用。酶联免疫 吸附检测技术是基于抗原抗体反应的特异性与酶对底物的高效催化活性相结合的免疫检测技术，通过将酶标记的抗原或抗体与待检标本中的相应成分 特异性结合，根据酶作用底物后的颜色变化，采用肉眼或酶标检测仪分析、 判断结果，其灵敏度较低(ng/ml)且操作繁琐，耗时较长。胶乳增强免疫比浊检测技术是目前在全自动生化分析仪上应用最广泛的检测技术，是基于 用胶乳颗粒作为标记物标记抗原或抗体进行的抗原抗体反应，通过抗原抗体 反应使胶乳颗粒交联形成浊度并与待检物浓度呈正比，但其灵敏度较低 (ng/ml)，对低浓度待检物无法保证准确度。免疫层析检测技术主要分为胶 体金免疫层析检测技术和荧光免疫层析检测技术，前者基于胶体金颗粒标记 物标记抗体或抗原进行反应，主要用于定性检测，后者基于其荧光标记物标 记抗体或抗原进行反应，通过检测荧光信号输出结果，其灵敏度较高 (pg/ml)，反应速度快且操作简便，被广泛应用于急诊和床旁诊断，但是其 固相反应原理导致其重复性不好，只能应用于初步筛查结果。化学发光免疫检测技术是将化学发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的 一种新型标记免疫测定技术，通过将发光物质或酶直接标记于抗原或抗体 上，反应后经氧化剂或催化剂的激发后，即可快速产生发光，其产生的光量 子的强度与待测物的浓度可成比例，化学发光免疫检测技术具有高灵敏度(fg/ml)、特异性和稳定性，宽线性范围，高通量和高度自动化等特点被临床广泛应用。上述常用免疫检测技术有各自的优势，但也有各种不同的缺陷， 例如灵敏度低、反应时间长、操作繁琐、不能同时联合检测多个生物标志物 等等。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种基于核酸滚环扩增反应的同时检 测多种生物标志物的试剂盒，可同时检测多种生物标志物，具有灵敏度高、 结果准确、操作简易、反应时间短且不同生物标志物之间不干扰等优点。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种基于核酸滚环扩增反应的同时检测多种生物标志物 的试剂盒，所述试剂盒由4个独立包装的组分组成；

组分1包括标记单链脱氧核糖核酸的特异性抗体溶液，每个所述生物标 志物标记不同的单链脱氧核糖核酸；

组分2包括包被所述生物标志物的特异性抗体的磁珠悬浊液；组分1中 的特异性抗体与组分2中的特异性抗体不同，但互为配对，且能够实现对所 述生物标志物的双抗夹心反应；

组分3包括含有不同环状脱氧核糖核酸的反应液，所述环状脱氧核糖核 酸分别与组分1中的对应的单链脱氧核糖核酸部分互补；

组分4包括含有不同探针的反应液，所述探针中包括一个荧光基团、一 个脱嘌呤/脱嘧啶和一个淬灭基团。