[发明专利]一种快速荧光蛋白酶活性检测方法

说明书

本发明公开了一种快速荧光蛋白酶活性检测方法，预先设定一份蛋白酶含量值参考表；S2、配置荧光用探针的荧光溶液；S3、根据预先设定的蛋白酶含量值参考表对应不同颜色的荧光溶液；创建蛋白酶荧光色参考表；S4、测定样品中是否有蛋白酶；S5、然后将样品中含有蛋白酶的样品放入到S2的荧光溶液中，进行培养，在温度为20‑37℃条件下,培养1.5‑2小时；S6、用户在35‑37°C下进行荧光光谱跟踪检测，获得显示不同的荧光颜色，然后在蛋白酶荧光色参考表中查找对应的蛋白酶含量值。本发明整个操作工艺简单，能够增加快速的发现检测样品中是否有蛋白酶。

技术领域

本发明涉及一种蛋白酶标记的技术领域，特别涉及一种快速荧光蛋白酶活性检测方法。

背景技术

蛋白酶是最重要的一种工业酶制剂，能催化蛋白质和多肽水解，广泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中。在干酪生产、肉类嫩化和植物蛋白改性中都大量的使用蛋白酶。此外，胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、羧肽酶和氨肽酶都是人体消化道中的蛋白酶，在它们的作用下，人体摄入的蛋白质被水解成小分子肽和氨基酸。

蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在 pH 为8.0 、温度为 37℃ 时，胰酶溶液的作用能力最强。使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。因 Ca2+ 、 Mg2+ 和血清、蛋白质可降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含 Ca2+ 、 Mg2+ 的 BSS ，如： D-Hanks 液。终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。

目前在焙烤工业中使用的蛋白酶有霉菌蛋白酶、细菌蛋白酶和植物蛋白酶。面包生产中应用蛋白酶能改变面筋性能，其作用形式和面包调制时力的作用及还原剂的化学反应不同。蛋白酶的作用不是破坏二硫键，而是断开形成面筋的三维网状结构。蛋白酶在面包生产中的作用主要表现在面团发酵过程中。由于蛋白酶的作用，使面粉中的蛋白质降解为肽、氨基酸，以供给酵母碳源，促进发酵，因此说明蛋白酶很重要，而蛋白酶广泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中。微生物蛋白酶，主要由霉菌、细菌，其次由酵母、放线菌生产，目前一般通过无影管检测蛋白酶，整个检测工艺复杂，而且后期查看也不太方便，故此需要改进，如何利用荧光标记的方式来检测蛋白酶位置显得尤为重要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速荧光蛋白酶活性检测方法，以解决上述背景技术中提出的检测工艺复杂的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种快速荧光蛋白酶活性检测方法，包括以下步骤：

S1、预先设定一份蛋白酶含量值参考表；

S2、配置荧光用探针的荧光溶液：以市售纯度高于98%的芘、尼罗红、 香豆素481、 苏丹红、 氟硼荧染料为荧光探针，将疏水性染料溶解到市售光谱纯丙酮、 氯仿或甲醇的有机溶剂中并添加具有不同温度下和200-500nm不同紫外光激发下呈现不同发光颜色的荧光材料， 配制荧光溶液；

S3、根据预先设定的蛋白酶含量值参考表对应不同颜色的荧光溶液；创建蛋白酶荧光色参考表；

S4、测定样品中是否有蛋白酶；

S5、然后将样品中含有蛋白酶的样品放入到S2的荧光溶液中，进行培养，在温度为20-37℃条件下,培养1.5-2小时；

S6、用户在35-37°C下进行荧光光谱跟踪检测，获得显示不同的荧光颜色，然后在蛋白酶荧光色参考表中查找对应的蛋白酶含量值。

进一步，还包括在标记蛋白酶时还需要预先创建不同温度下，对应荧光材料的颜色变化，然后根据样品的实时温度，查询对应标记荧光的颜色值。