[发明专利]一种快速荧光蛋白酶活性检测方法

权利要求书

1.一种快速荧光蛋白酶活性检测方法，其特征在于包括以下步骤：

S1、预先设定一份蛋白酶含量值参考表；

S2、配置荧光用探针的荧光溶液：以市售纯度高于98%的芘、尼罗红、 香豆素481、 苏丹红、 氟硼荧染料为荧光探针，将疏水性染料溶解到市售光谱纯丙酮、 氯仿或甲醇的有机溶剂中并添加具有不同温度下和200-500nm不同紫外光激发下呈现不同发光颜色的荧光材料， 配制荧光溶液；

S3、根据预先设定的蛋白酶含量值参考表对应不同颜色的荧光溶液；创建蛋白酶荧光色参考表；

S4、测定样品中是否有蛋白酶；

S5、然后将样品中含有蛋白酶的样品放入到S2的荧光溶液中，进行培养，在温度为20-37℃条件下,培养1.5-2小时；

S6、用户在35-37°C下进行荧光光谱跟踪检测，获得显示不同的荧光颜色，然后在蛋白酶荧光色参考表中查找对应的蛋白酶含量值。

2.根据权利要求1所述的一种快速荧光蛋白酶活性检测方法，其特征在于：还包括在标记蛋白酶时还需要预先创建不同温度下，对应荧光材料的颜色变化，然后根据样品的实时温度，查询对应标记荧光的颜色值。

3.根据权利要求1所述的一种快速荧光蛋白酶活性检测方法，其特征在于：在步骤S4中测定样品中是否有蛋白酶的具体方法如下：取样品中的部分，加入浓度为2-3μM的氮杂环罗丹明双酰胺培养液培养1-3小时，然后通过检测培养液的荧光強度，判断蛋白酶的存在情况，荧光强度越高，蛋白酶越多。

4.根据权利要求1所述的一种快速荧光蛋白酶活性检测方法，其特征在于：在步骤S4中测定样品中是否有蛋白酶的具体方法还可以是：取样品中的部分加入金属纳米簇反应，得到反应产物，检测所述反应产物的荧光强度，所述反应产物无变化判断所述样品中无蛋白酶，若有变化，说明样品中有蛋白酶。

5.根据权利要求1所述的一种快速荧光蛋白酶活性检测方法，其特征在于：在步骤S2中配置荧光用探针的荧光溶液：以市售纯度高于98%的芘、尼罗红、 香豆素481、 苏丹红、 氟硼荧染料为荧光探针，将疏水性染料溶解到市售光谱纯丙酮、 氯仿或甲醇的有机溶剂中并添加具有不同温度下和450nm紫外光激发下呈现不同发光颜色的荧光材料， 配制荧光溶液。

6.根据权利要求1所述的一种快速荧光蛋白酶活性检测方法，其特征在于: 在步骤S6中用户在36°C下进行荧光光谱跟踪检测，获得显示不同的荧光颜色，然后在蛋白酶荧光色参考表中查找对应的蛋白酶含量值。

7.根据权利要求4所述的一种快速荧光蛋白酶活性检测方法，其特征在于:所述金属纳米簇包括牛血清蛋白-金纳米簇或牛血清蛋白-银纳米簇或多肽-金纳米簇或多肽-银纳米簇中的一种。