[发明专利]一种提取病毒核酸的试剂盒和提取方法

说明书

本发明提供了一种提取病毒核酸的试剂盒和提取方法。本发明第一方面提供了一种提取病毒核酸的试剂盒，包括裂解液、磁珠悬浮液、蛋白酶K溶解液、核酸助沉剂溶液、洗涤液和洗脱液；其中，裂解液包括Tris‑HCL、异硫氰酸胍、N‑月桂酰肌氨酸钠、EDTA、TritonX‑100、CTAB和Antifoam 204；洗涤液包括Tris‑HCL、PEG6000和氯化钠；洗脱液为纯水。本发明提供的试剂盒和提取方法提高了核酸的提取效果，而且可实现室温下病毒核酸的提取，避免了加热处理造成的基因污染，此外，还避免了乙醇对提取过程的影响，与常规磁珠法相比，提取时间可缩短至15min左右，提取过程更加快捷简便。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，尤其涉及一种病毒核酸提取试剂盒和提取方法。

背景技术

核酸提取技术是病毒分子生物学研究的基础，现已广泛应用于病原微生物检测、临床疾病诊断、环境微生物检测、食品安全检测以及法医学鉴定等众多领域。在提取过程中要遵循以下原则：提取尽可能充分，保证一级结构的完整性，避免蛋白质、脂类物质和多糖等生物大分子的污染，并且尽可能缩短和简化提取流程。一种提取效率高、时间短、操作简单的核酸提取试剂已成为快速分子诊断技术的关键。

目前，磁珠法技术越来越主导核酸提取市场，其主要原理是在磁珠上标记特异性吸附核酸的物质来特异性吸附核酸，并通过磁分离技术将核酸从磁珠表面洗脱。具体包括裂解、吸附、洗涤、洗脱四个步骤，其中，裂解主要是通过异硫氰酸胍提取待测样品的DNA/RNA，吸附通常是在磁力架上进行，利用改良和表面修饰后的磁珠吸附DNA/RNA，洗涤主要分三次进行，前两次主要使用主成分为盐酸胍和乙醇的buffer，用于去除蛋白杂质，第三次主要使用主成分为乙醇的buffer去除盐离子，洗涤后需要在通风处将磁珠晾干，晾干后使用Tris-HCL或水溶液对磁珠进行洗脱，现有的磁珠法存在较多的缺陷，例如，裂解过程一般需要在50-55℃下孵育15-20分钟，期间间隔每5分钟左右，需要颠倒3-4次，操作十分麻烦；晾干过程主要用于去除残留乙醇，不仅耗费时间，而且操作不当容易导致乙醇残留，影响PCR扩增速率；为了加速DNA/RNA的释放和洗脱，通常在裂解和洗脱过程进行加热处理，在加热容易造成基因污染，造成假阳性的检测结果；现有的磁珠法的整个提取时间需要40min左右，耗时太长，因此，本领域技术人员致力于开发一种病毒核酸提取试剂盒和提取方法，弥补现有缺陷。

发明内容

有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种提取效率高、时间短的提取病毒核酸的试剂盒和提取方法。

为实现上述目的，本发明第一方面提供了一种提取病毒核酸的试剂盒，所述试剂盒包括裂解液、磁珠悬浮液、蛋白酶K溶解液、核酸助沉剂溶液、洗涤液和洗脱液；

其中，所述裂解液包括Tris-HCL、异硫氰酸胍、N-月桂酰肌氨酸钠、EDTA、TritonX-100、CTAB和Antifoam 204，所述异硫氰酸胍的浓度为2-6M；

所述蛋白酶K溶解液包括蛋白酶K、甘油、乙酸钠和氯化钙；

所述洗涤液包括Tris-HCL、PEG6000和氯化钠；

所述洗脱液为纯水。

进一步地，所述裂解液中，Tris-HCL的浓度为30-60mM、N-月桂酰肌氨酸钠的质量分数为0.05-2％、EDTA的浓度为5-10mM、TritonX-100的体积分数为1-3％、CTAB的质量分数为0.1-1％、Antifoam 204的体积分数为0.1-1％，其中，所述Tris-HCL的pH为8.0-9.5。

进一步地，所述磁珠悬浮液中磁珠的浓度为20-50mg/mL。

进一步地，所述磁珠的粒径为10-50nm。