[发明专利]一种提取病毒核酸的试剂盒和提取方法

权利要求书

1.一种提取病毒核酸的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括裂解液、磁珠悬浮液、蛋白酶K溶解液、核酸助沉剂溶液、洗涤液和洗脱液；

其中，所述裂解液包括Tris-HCL、异硫氰酸胍、N-月桂酰肌氨酸钠、EDTA、TritonX-100、CTAB和Antifoam 204，所述异硫氰酸胍的浓度为2-6M；

所述蛋白酶K溶解液包括蛋白酶K、甘油、乙酸钠和氯化钙；

所述洗涤液包括Tris-HCL、PEG6000和氯化钠；

所述洗脱液为纯水。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述裂解液中，Tris-HCL的浓度为30-60mM，N-月桂酰肌氨酸钠的质量分数为0.05-2％、EDTA的浓度为5-10mM、TritonX-100的体积分数为1-3％、CTAB的质量分数为0.1-1％、Antifoam 204的体积分数为0.02-0.1％，其中，所述Tris-HCL的pH为8.0-9.5。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述磁珠悬浮液中磁珠的浓度为20-50mg/mL。

4.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述磁珠的粒径为10-50nm。

5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述蛋白酶K溶解液中，蛋白酶K的浓度为50-100mg/mL、甘油的体积分数为30-70％、乙酸钠的浓度为10-40mM、氯化钙的浓度为0.1-0.5mM，其中，所述乙酸钠的pH为7.0-8.0。

6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述核酸助沉剂的浓度为10-30mM。

7.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述洗涤液中，Tris-HCL的浓度为10-50mM、PEG6000的质量分数为5-10％，氯化钠的浓度为300-500mM，其中，所述Tris-HCL的pH为8.0-9.0。

8.一种使用权利要求1-7任一项所述试剂盒的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1、将待测样品、裂解液、蛋白酶K溶解液、核酸助沉剂溶液、异丙醇和磁珠悬浮液混合均匀，室温孵育5min，期间混匀2次，随后磁性分离得到吸附病毒核酸后的磁珠；

步骤2、将所述吸附病毒核酸后的磁珠重悬于洗涤液中，洗涤两次后收集洗涤后的磁珠；

步骤3、将所述洗涤后的磁珠重悬于洗脱液中，室温孵育5min，并收集洗脱液。

9.如权利要求8所述提取方法，其特征在于，步骤1中，将150-300μL的待测样品、300-500μL的裂解液、20-50μL蛋白酶K溶解液、5-20μL核酸助沉剂溶液、100-300μL异丙醇和50-100μL磁珠悬浮液混合均匀；步骤2中，洗涤液为500-1000μL；步骤3中，洗脱液为50-100μL。

10.如权利要求9所述的提取方法，其特征在于，步骤1中，所述待测样品和所述裂解液的体积比为1：1～1.75。