[发明专利]一株贝莱斯芽孢杆菌Z002、获取方法及其应用

说明书

本发明公开了一株贝莱斯芽孢杆菌Z002、获取方法及应用，所述杆菌已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No：M 2020567。获取方法包括分离、筛选、纯化工序，首先从烟株组织中分离内生细菌并经黑暗培养后，筛选拮抗烟草霉变病菌米根霉的内生细菌，最后纯化即得。其应用包括发酵、接种、调制工序，首先将菌株培养获得发酵菌剂，用喷雾器喷施于烟叶叶柄，将烟叶装入烤房，按正常烘烤工艺烘烤烟叶。所述菌株贝莱斯芽孢杆菌Z002能实现对烘烤期烟草霉变病的有效控制，相对防效在以上80％。其次，所述杆菌还对烟草青枯病菌、黑胫病菌、灰霉病菌、菌核病菌、靶斑病菌、根腐病菌、赤星病菌等具有很好的抑菌作用。本发明的防治效果好，具有较高的推广应用价值。

技术领域

本发明属于微生物应用技术领域，涉及一株贝莱斯芽孢杆菌Z002、获取方法及其应用，具体涉及一株能实现高效防治烘烤期霉变病的贝莱斯芽孢杆菌Z002，及其获取方法和在烤房烟草霉变病防治中的应用。

背景技术

烘烤期烟草霉变病是由米根霉(Rhizopus oryzae)侵染引起的真菌性病害，可以为害烟叶叶柄、叶肉组织，以叶基霉烂型为主，发病率达30％以上，损失在20％左右。因此，烟草霉变病对烟叶生产的危害十分严重。

对烘烤期烟草霉变病的防治方法有化学药剂、烘烤设备改进和生物防治等。

化学防治方法虽然防治效果较好，但因其存在农药残留和容易产生耐药性等问题，影响烟叶的安全性，其应用受到限制。

烘烤设备改进主要是基于现有烤房通风排湿效果差而进行的改进或建立新型烤房，该措施成本较高，需要一定时间的推广示范带动。

生物防治由于其防效高、专一性强、环境友好，以及不易产生抗药性等优点，因而受到青睐。

目前，用于防治烘烤期霉变病的微生物报道较少，仅有胶质芽孢杆菌(Bacillusmucilaginosus)(CN110384247A)、组合微生物菌剂(CN110250209A)作为生防产品防治烘烤期烟草霉变病的报道。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一株能实现高效防治烘烤期霉变病的贝莱斯芽孢杆菌Z002。本发明的第二目的在于提供所述贝莱斯芽孢杆菌Z002的获取方法。本发明的第三目的在于提供所述贝莱斯芽孢杆菌Z002在烘烤期烟草霉变病防治中的应用。本发明的第四目的在于提供所述贝莱斯芽孢杆菌Z002在烟草青枯病、黑胫病、灰霉病、菌核病、靶斑病、根腐病、赤星病防治中的应用。

本发明的第一目的是这样实现的：

一株贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)，命名为Z002，经生物学特性检测和16S rDNA序列分析鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)的一个株系，是从烟株组织中分离得到，已于2020年10月5日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址为：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学，中国典型培养物保藏中心，邮编：430072)，其保藏编号为CCTCC No：M 2020567。

本发明的第二目的是这样实现的：

一种所述贝莱斯芽孢杆菌的获取方法，包括分离、筛选及纯化工序，具体包括：

A、分离：取经检验表面灭菌彻底的烟株组织0.4～0.6g，与灭菌钢珠一并放入2mL灭菌离心管中，加入400～700μL无菌水，用组织研磨器研磨2～4min，频率为20～40r/s。梯度稀释研磨后的组织液至10^-4，每梯度各取100～300μL匀浆液涂分离培养基，每处理重复4次。25～30℃黑暗培养36～72h后根据菌落形态、颜色等不同挑取单菌落，重新于分离培养基上划线纯化，挑取划线培养的单菌落移入分离培养基试管斜面保存；

培养条件为：25～30℃，时间40～55h；