[发明专利]一株抑菌枯草芽孢杆菌微生态制剂制备工艺

说明书

本发明公开了一株抑菌枯草芽孢杆菌微生态制剂制备工艺，命名为枯草芽孢杆菌QR‑KC‑008。本发明提供的枯草芽孢杆菌QR‑KC‑008对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、镰刀菌都具有较强的抑制作用，同时发酵代谢产酶活性较高，基于上述特定优势，本发明提供的枯草芽孢杆菌微生态制剂可以应用饲料添加剂中替代抗生素领域。

技术领域

本发明属于微生态饲料添加剂技术领域，具体涉及一株抑菌枯草芽孢杆菌及微生态制剂制备工艺。

背景技术

由于滥用各种抗生素、激素和违禁药品饲喂畜禽，而导致食品安全事件频发，抗药性菌株出现，随之带来巨大的食品安全潜在风险，可见开发高效优质的生物饲料产品替代抗生素、激素，生产绿色无公害、有机肉、蛋、奶是国家和全民食品安全需要的民生问题。

近几年来人们研究开发出了饲用酶制剂、饲用微生物制剂、酸化剂、抗菌肽、寡聚糖、大蒜素、中草药以及有机金属微量元素等抗生素替代品，这些绿色饲料添加剂得到了人们的青睐，都是基于抑制有害菌增殖、促进有益菌增殖、改善肠道微环境的基础上进行研究的，但总体来说，这些抗生素替代产品相对于抗生素而言，其作用效果仍有一定的差距。

各种动物及家禽自幼小个体发育开始，体内就建立起平衡的微生物菌群，并有其维持自身菌群稳态的机制，例如抗氧化因子、激素、蛋白、小肽等是维持机体微环境稳定的重要因子。

因此，开发无毒副作用、安全高效的具有抗感染性能的益生菌菌株，可以减少、替代甚至取代抗生素的使用，有效降低抗生素带来的一系列的副作用。枯草芽孢杆菌是自然界中广泛存在的一种非致病性细菌，能产生多种抗真菌和细菌的代谢物，不会产生耐药性，将其作为抗生素的替代品，其研究和开发意义重大，市场前景广阔。

发明内容

基于市场发展需求以及发展趋势，本发明提供了一株抑菌枯草芽孢杆菌微生态制剂制备工艺。

本发明所述菌株的主要生物学特征为：好氧菌，细胞大小(0.7μm～0.9μm)×(1.7μm～2.6μm)，菌体呈杆状，菌体单个存在，无荚膜，周生硬毛、能运动的革兰氏阳性菌；芽孢位于菌体中央，呈椭圆形或柱状，大小为0.8μm×(1.2μm～1.5μm)；脱落的芽孢形成后菌体不膨大，菌落表面粗糙不透明；培养基上的菌落圆或者不规则形，表面色暗，变厚和不透明，有褶皱，菌落呈现奶油色或微黄色，发酵培养能够利用能利用葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、淀粉、植物蛋白、动物源蛋白，能水解淀粉、色氨酸；生长温度范围40℃～50℃，最适温度为43℃。

本发明所属枯草芽孢杆菌菌株具有较强的蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶酶促活性，此项生物活性功能可以将本发明菌株应用到饲料添加剂中。

本发明提供一种枯草芽孢杆菌微生态制剂，其主要活性成分为编号QR-KC-008的枯草芽孢杆菌菌株。

本发明所述的枯草芽孢杆菌生产工艺流程：斜面母种→三角瓶母种→50L液体种子罐母种→500L液体种子罐→10T液体发酵罐接种→产品（液体菌剂或粉剂）。

本发明所述枯草芽孢杆菌菌剂制备工艺包括以下具体步骤：

（1）菌株选用编号QR-KC-008的枯草芽孢杆菌菌株；

（2）斜面母种培养：将采用甘油冻干管保存的枯草芽孢杆菌菌株接种于固体斜面培养基上，40℃培养2d；

（3）三角瓶母种培养：将制备好的斜面母种，在无菌条件下接种，用接种环挑取两环于150mL三角瓶母种培养基中，在40℃，150r/min培养1.5d，制得一级三角瓶种子液；

（4）扩大培养：将一级种子液以2.5%的接种量（体积百分比），接接种到5L种子液体培养基中，在40℃，150r/min培养1.5d，制得二级三角瓶种子液；

（5）50L液体种子罐种子液制备：将二级三角瓶种子液已2.5%（体积百分比）的接种量接种到50L液体种子罐培养基中，于42℃，罐压0.05MPa，通气量2.5m3/h条件下培养24-26h；