[发明专利]一种融合基因及其应用

权利要求书

1.一种融合基因，其特征在于，所述融合基因由重组家蚕杆状病毒vBmBac-egfp-gp_short中截短埃博拉囊膜蛋白GP基因的3’端与SEQ ID NO.1所示的序列融合组成，所述重组家蚕杆状病毒vBmBac-egfp-gp_short由以下方法构建：用引物5’-CGCTCTAGAATGGGCGTTACAGGAATATTG-’3及5’- CCCGGATCCGTCTCCATCCTGTCCACCAAT-’3，以含有埃博拉囊膜蛋白GP基因的质粒pFBD-egfp-gp1,2为模板，PCR方法扩增目的基因，扩增片段用Xba I和Bam HI酶切，获得截短埃博拉囊膜蛋白GP基因；合成外源序列：5’CGCGGATCCATGTTTGGTCATGTAGCTACCTTTGTAATTGTATTTATTGTAATTTTATTTTTGTACTGTATGGTTAGAAACCGTAATAGTAGACAATATTAAAAGCTTCCC3’，用BamHI和Hind III酶切，回收，备用；分别用XbaI与HindIII酶切质粒pFast-egfp-gp1,2，回收载体，备用；将上述截短埃博拉囊膜蛋白GP基因、回收的合成外源序列和回收的载体按照常规分子生物学方法连接，转化DH10B感受态细胞，筛选重组供体质粒，鉴定后，命名pFBD-egfp-gp_short，提取其DNA，溶解于20 μL超纯水备用；取0.4μg上述构建载体pFBD-egfp-gp_short转化携带 BmBacJS13和辅助质粒的 DH10B 感受态细胞中，转接大肠杆菌液体培养基中37℃ 培养 4h，然后在含有 Kanamycin，Gentamicin和IPTG、X-gal 的固体培养基平板上筛选重组 Bacmid，挑取白斑菌落入大肠杆菌液体培养基，过夜培养后，提取DNA，PCR进一步鉴定，筛选正确的重组Bacmid，命名为BmBac-egfp-gp_short，在35 mm 细胞培养皿中各接种约5×10⁵个/ 皿的BmN细胞，贴壁后，用2μLlipofectin转染试剂、30 μL无血清培养基和2 μg BmBac-egfp-gp_short DNA混合液转染细胞，转染4 h后，除去转染混合液，添加新鲜培养基常规培养，72小时后，收集上清，取50μL收集上清，继续感染健康BmN细胞，72小时收集上清，获得重组家蚕杆状病毒vBmBac-egfp-gp_short。

2.权利要求1所述融合基因在提高重组家蚕杆状病毒中BV病毒粒子中埃博拉膜蛋白GP表达量的应用。

3.权利要求1所述融合基因在提高重组家蚕杆状病毒中BV病毒囊膜中埃博拉GP蛋白表达量的应用。

4.权利要求1中所述重组家蚕杆状病毒vBmBac-egfp-gp_short在制备GP疫苗中的应用。