[发明专利]一种基于光催化交联蛋白的手性固定相的制备方法、手性固定相及应用

说明书

本发明公开了一种基于光催化交联蛋白的手性固定相的制备方法、手性固定相及应用，所述基于光催化交联蛋白的手性固定相的制备方法包括，光催化交联，向蛋白溶液中依次加入三(2，2'‑联吡啶)二氯化钌(II)六水合物和过硫酸铵，光照下进行光催化交联反应；固载，取经过修饰偶联的硅胶，加入经过光催化交联的蛋白溶液，充分搅拌、抽滤、烘干，得到本发明的手性固定相。本发明的BSA‑CSP是一类全新结构的手性分离固定相，可适用于包括氨基酸在内的、与蛋白序列有一定结合能力的化学品的手性拆分。

技术领域

本发明属于手性分离技术领域，具体涉及到一种基于光催化交联蛋白的手性固定相的制备方法、手性固定相及应用。

背景技术

手性，表述为物体与其镜像不同，是一种广泛存在于自然界中的特殊对称形式。手性物体与其镜像被称为对映体，这些对映体的基团空间排列顺序不同，往往会对其生理活性产生差异，构型不同的对映体在药理活性和毒副作用等方面也会表现出很大的差异。

单一对映体在自然界中含量有限，当生活中大量需要这种物质时，往往需要由人工合成。然而，单一对映体的不对称合成比较困难，工业上往往首先得到的是外消旋体，即是两种对映体同比例的混合物。这导致，一方面没有价值的无生理活性的对映体同时被合成出来会造成原材料的浪费，增加整个产品的生产成本；另一方面两种对映体的生理活性甚至毒性往往有着明显差异，不加以区分往往带来毁灭性后果，比如1969年的沙利度胺(Thalidomide)事件，导致约1.3万海豹儿的诞生，数以万计的孕妇深受其害。因此，手性分离在化学工业，特别是制药产业中非常重要。

手性拆分的方法有多种，如薄层色谱法(TLC)、气相色谱法(GC)、超临界流体色谱法(SFC)、毛细管电泳法(CE)、毛细管电色谱法(CEC)、模拟移动床色谱技术(SMB)和高效液相色谱法(HPLC)等。其中，HPLC法由于具有测定对映体速度快、柱效高、分离能力强和应用范围广等特点，是目前手性分离中应用最多的方法。

手性固定相法作为高效液相色谱最常用的方法，手性固定相的开发与制备是其核心所在。手性固定相的合成按照合成思路主要可分为键合型和涂敷型两种方式。按照分离的机理可将其分为独立型固定相和协同型固定相两种，其更具体的分类主要分为刷型、环糊精型、大环抗生素型、冠醚型、配体交换型、多糖型和蛋白质型等。

蛋白质类手性固定相是指将蛋白质类物质固定到适合的载体上，获得手性色谱固定相填料柱或手性整体柱。蛋白质是生物体内重要的组成物质，是一类天然生物聚合物，它们是由氨基酸或者氨基酸和糖组成，这些都是具有手性的，因此所有的蛋白质都具有手性识别能力。然而，由于蛋白质大多稳定性较差，且活性反应基团众多，难以将其均一性地键合在适当的载体上，目前仅有很少一部分的蛋白被用于手性分析，如人血清白蛋白(HSA)、牛血清白蛋白(BSA)、糖蛋白(Glycoproteins)、卵类粘蛋白(Ovomucoid)、抗生物素蛋白(Avidin)等。制备基于蛋白质的CSP的固定化方法包括物理吸附、共价固定化和包封。物理吸附的主要优点是简单，这种方法通常是在适当的pH值和溶液条件下通过柱泵输送蛋白质溶液进行吸附。这种技术可用于快速评估CSPs中使用的新候选蛋白质。但其缺点是，通过物理吸附制备的CSP由于吸附蛋白与载体之间存在弱相互作用而可能存在稳定性问题。

发明内容

本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

鉴于上述和/或现有技术中存在的问题，提出了本发明。