[发明专利]一种基于光催化交联蛋白的手性固定相的制备方法、手性固定相及应用

权利要求书

1.一种基于光催化交联蛋白的手性固定相的应用，其特征在于：用以分离混合的外旋体氨基酸，方法为：

选用内径为1cm、长为20cm的层析柱，填装制备好的牛血清白蛋白手性固定相，填柱高度为7cm；将混合的外旋体氨基酸配成0.03mol/L的样品溶液，向层析柱上加入混合的外旋体氨基酸1.0mL，洗脱液使用无水乙醇，流速控制在1mL/min，取10mL规格离心管收集层析液，每管收集2mL，收集的层析液后使用无水乙醇稀释5倍；

其中，所述牛血清白蛋白手性固定相的制备方法为：

称取20g硅胶，溶于60mL6.0M HCl中，150℃搅拌回流8h，将活化后的硅胶抽滤，用蒸馏水洗至中性，将产物70℃干燥8h，装入试剂瓶内备用，得到活化硅胶；

将1.2mL的γ-巯丙基三甲氧基硅烷加入到含有10mL的95％乙醇的20mL的烧杯中，使用旋涡混合仪充分混合，用浓盐酸调节体系的pH值至5，倒入锥形瓶中，加入活化后的硅胶15g，然后将该锥形瓶于恒温摇床中，37℃，150rpm，反应4h，取出后，先用乙醇反复超声振动清洗，之后用去离子水充分清洗，直至表面的乙醇被清洗干净，得到巯基化修饰的硅胶；

取20mL配制好的1mM的4-马来酰亚胺基丁酸-N-琥珀酰亚胺酯溶液放置于50mL的锥形瓶中，之后将巯基化修饰过的硅胶加入到锥形瓶中，然后将锥形瓶放置于恒温摇床中，温度设置为37℃，转速为150rpm，反应1h后取出，放置阴凉通风处风干，得到修饰偶联的硅胶；

取一50mL离心管，离心管用锡纸包裹避光，向其中加入30mL 浓度为10mg/mL的牛血清白蛋白溶液，再依次加入1mL的0.0125M的三(2，2'-联吡啶)二氯化钌(II)六水合物和1mL的0.25M的过硫酸铵，然后置于200W的白炽灯下，光照时间控制在10s，得到光催化交联牛血清白蛋白；

取10g修饰偶联的硅胶放入20mL小烧杯中，加入光催化交联后的牛血清白蛋白溶液10mL，用玻璃棒充分搅拌使交联的牛血清白蛋白尽可能地附着在修饰后的硅胶上，抽滤，用pH ＝7.4的PBS缓液多次清洗，抽滤，最后37℃烘干制得牛血清白蛋白手性固定相。