[发明专利]一种rhGH中和抗体的检测方法

说明书

本发明涉及生物制药领域，特别涉及一种rhGH中和抗体的检测方法。该方法包括：将样品置于50～60℃条件下灭活30～35分钟；样品包括待检血清样品、阴性对照样品、阳性对照样品；将灭活后的样品与rhGH工作液混合，在CO₂条件下进行孵育，得到中和后的样品；将细胞悬液与中和后的样品混合，在CO₂条件下进行细胞培养；将细胞显色液与培养后的细胞混合，室温下避光静置；采用荧光细胞活性检测系统检测活细胞数目，得到待检血清样品的抑制率，判断待检血清样品中是否存在rhGH中和抗体。该方法灵敏度高，能检测出人血清中较低浓度的rhGH中和抗体。抗血清干扰能力强，药物耐受水平也比较高，可应用于rhGH药物受试者群体。

技术领域

本发明涉及生物制药领域，特别涉及一种rhGH中和抗体的检测方法。

背景技术

重组人生长激素(Recombinant Human Growth Hormone，rhGH)的氨基酸含量、空间构象及序列与人生长激素完全相同，具有与人体内源性生长激素等同的生物学作用：刺激骨骺端软骨细胞分化、增殖，刺激软骨基质细胞增长，刺激成骨细胞分化、增殖，引起线性生长加速及骨骼变宽；促进全身蛋白质合成，纠正手术等创伤后的负氮平衡状态，纠正重度感染及肝硬化等所致低蛋白血症；刺激免疫球蛋白合成，刺激淋巴样组织、巨噬细胞和淋巴细胞的增殖，增强抗感染能力；刺激烧伤创面及手术切口胶原体细胞合成纤维细胞以及巨噬细胞分裂增殖，加速伤口愈合；促进心肌蛋白质合成，增加心肌收缩力，降低心肌耗氧量，调节脂肪代谢，降低血清胆固醇、低密度脂蛋白的水平；补充生长激素分泌不足或缺乏，调节成人的脂肪代谢、骨代谢、心肾功能。

随着对生物药物免疫原性的检测越来越重视，给药过程中产生的中和抗体的检测也成为药物开发阶段的重要关注点。中和抗体能够通过直接与药物作用结合位点结合，或者通过空间位阻的作用使药物失去与其靶点结合的能力，从而阻断、中和药物的治疗活性。因此，在药物开发过程中(包括临床前研究和临床试验阶段)，对中和抗体的检测和评价已经成为药品监管部门的常规要求，由于细胞学检测方法更能接近体内的药物作用情况。与其他免疫原性检测方法相比(如Elisa方法)，基于细胞的检测方法所用细胞的表面受体呈自然状态，更能模拟体内药物与受体结合的过程，所以中和抗体的检测方法FDA推荐使用细胞学方法(FDA,Guidance for Industry:Immunogenicity Testing of TherapeuticProtein Products—Developing and Validating Assays for Anti-Drug AntibodyDetection.2019)。

基于细胞学检测中和抗体的方法，由于细胞引入的不确定因素较多，一直以来都存在灵敏度低的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种稳定的基于细胞学的rhGH抗体中和活性测定方法。该方法灵敏度高，能检测出人血清中较低浓度的rhGH中和抗体。抗血清干扰能力强，药物耐受水平也比较高，可应用于rhGH药物受试者群体。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种rhGH中和抗体的检测方法，包括以下步骤：

步骤1：将样品置于50～60℃条件下灭活30～35分钟；样品包括待检血清样品、阴性对照样品、阳性对照样品；

步骤2：将灭活后的样品与rhGH工作液混合，在37℃、5％CO₂培养箱中进行孵育，得到中和后的样品；

步骤3：将细胞悬液与中和后的样品混合，在37℃、5％CO₂条件下进行细胞培养；

步骤4：将细胞显色液与培养后的细胞混合，室温下避光静置；

步骤5：采用荧光细胞活性检测系统检测活细胞数目，得到待检血清样品的抑制率，判断待检血清样品中是否存在rhGH中和抗体。