[发明专利]一种人诱导多能干细胞及其培养方法和用途

说明书

本发明涉及一种人诱导多能干细胞及其培养方法和用途。本发明提供的技术方案带来的有益效果至少包括：使糖尿病患者减少或停止注射胰岛素；增强糖尿病患者的身体健康；有效预防并修复糖尿病患者的并发症。

技术领域

本发明属于干细胞培养领域，具体涉及一种人诱导多能干细胞及其培养方法和用途。

背景技术

自从胰岛素被发现以来，就被用于日常注射来治疗胰岛素缺乏型糖尿病。但是，随着症状的加重，外源性胰岛素的给药需要加强，剂量越来越大，单纯使用胰岛素不能将血糖维持在狭窄的生理范围内，因为胰岛素注射无法精确模拟胰岛β细胞来调节胰岛素分泌以应对血糖水平的变化。目前，现有的糖尿病治疗方法在预防糖尿病并发症进展和修复现有组织损伤方面效果有限。

发明内容

为了获得能够在体外培养产生胰岛素的胰岛素分泌细胞，本发明提供了一种人诱导多能干细胞及其培养方法和用途，该细胞能够从人多能脂肪干细胞中培养出产生胰岛素的人诱导多能干细胞从而实现体外胰岛素分泌，用于治疗胰岛素缺乏型糖尿病，而且该人诱导多能干细胞能够替代并修复糖尿病并发症中损伤死亡的功能细胞，起到治疗及预防糖尿病并发症的作用。

为实现上述目的，本发明的一个目的在于提供一种人诱导多能干细胞，所述人诱导多能干细胞转染有人雌激素相关受体γ基因(human estrogen-related receptorγgene，ERRγ)和/或人胰岛素基因(human insulin gene,INS)。

本发明的另一目的在于提供一种制备人诱导多能干细胞的方法，所述方法包括：使用人雌激素相关受体γ基因和/或人胰岛素基因对人多能脂肪干细胞进行转染处理，得到人诱导多能干细胞。

作为本发明的一个实施例，所述人多能脂肪干细胞为脂肪间充质干细胞或分泌胰岛素的间充质干细胞中的至少一种。

作为本发明的一个实施例，所述人多能脂肪干细胞的提取方法如下：

S1：通过胶原酶时间梯度消化法分离提取出原代脂肪间充质干细胞；

S2：将所述原代脂肪间充质干细胞通过贴壁法用培养基筛选出脂肪间充质干细胞；

S3：通过单克隆培养法培养多代所述脂肪间充质干细胞，筛选得到所述人多能脂肪干细胞。

作为本发明的一个实施例，所述转染处理为慢病毒转染处理。

作为本发明的一个实施例，所述慢病毒转染处理包括：慢病毒载体的克隆构建、慢病毒载体DNA的纯化、慢病毒载体的生产包装以及慢病毒载体的感染。

作为本发明的一个实施例，步骤S1中，所述胶原酶时间梯度为18-22min。

作为本发明的一个实施例，步骤S2中，所述培养基为间充质干细胞无异种成分培养基(StemPro MSC SFM XenoFree)；以所述培养基为基准，干细胞因子(STem CellFacTor,SCF)的浓度为10ng/mL，非必需氨基酸(Non-Essential Amino Acids,NEAA)的含量为1体积％，胰岛素-转铁蛋白-硒(Insulin-Transferrin-Selenium，ITS)的含量为1体积％。

本发明的再一目的是提供一种用于治疗糖尿病的药物，该药物含有上述人多能干细胞。

本发明的再一目的是提供上述人多能干细胞在制备用于治疗糖尿病的药物中的用途。

本发明提供的技术方案带来的有益效果至少包括：使糖尿病患者减少或停止注射胰岛素；增强糖尿病患者的身体健康；有效预防并修复糖尿病患者的并发症。

附图说明

图1为本发明实施例中倒置相差显微镜下的干细胞形态；

图2为本发明实施例中人脂肪干细胞的CD44表型；