[发明专利]一种通过灌流培养工艺制备腺病毒载体疫苗的方法有效
| 申请号： | 202011235524.0 | 申请日： | 2020-11-09 |
| 公开（公告）号： | CN112094814B | 公开（公告）日： | 2021-08-24 |
| 发明（设计）人： | 肖猛;刘云杰;朱涛;许允立;徐灿;李军强;巢守柏 | 申请（专利权）人： | 康希诺生物股份公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/861;A61K39/00;A61K48/00 |
| 代理公司： | 北京领科知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11690 | 代理人： | 王立红;张丹 |
| 地址： | 300457 天津市滨海新区经济技术开发*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 通过 灌流 培养 工艺 制备 病毒 载体 疫苗 方法 | ||
1.一种腺病毒载体疫苗的制备方法，包括如下的腺病毒宿主细胞的培养方法的步骤：
（1）接种宿主细胞，进行细胞培养；
（2）细胞密度达到1×106个/mL后开启灌流，灌流速率为2VVD；
（3）细胞密度生长至5×106个/mL后，调节灌流速率至3VVD；
其中，所述宿主细胞为293细胞；
所述细胞培养中，谷氨酰胺的浓度维持在2mM以上；
所述细胞培养的温度为32-38℃，pH为6.5-7.5，溶氧浓度为30-80%，搅拌速度为30-200rpm；
所述灌流通过利用连续灌流装置进行，所述连续灌流装置采用交替切向流细胞截留系统。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述截留系统中，中空纤维柱截留孔径为0.1~0.8μm。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述宿主细胞为HEK293细胞或HEK293.CS细胞。
4.一种腺病毒载体疫苗的制备方法，包括如下的腺病毒的生产方法的步骤：
（1）接种宿主细胞，进行细胞培养；所述宿主细胞为293细胞；
（2）细胞密度达到1×106个/mL后开启灌流，灌流速率为2VVD；
（3）细胞密度生长至5×106个/mL后，调节灌流速率至3VVD；
（4）接种病毒，培养；
步骤（4）中，所述培养为灌流培养，灌流速率为1-3VVD；
所述培养中，谷氨酰胺的浓度维持在2mM以上；
所述细胞培养的温度为32-38℃，pH为6.5-7.5，溶氧浓度为30-80%，搅拌速度为30-200rpm；
所述灌流通过利用连续灌流装置进行，所述连续灌流装置采用交替切向流细胞截留系统。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述截留系统中，中空纤维柱截留孔径为0.1~0.8μm。
6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述宿主细胞为HEK293细胞、HEK293.CS细胞。
7.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述腺病毒为人腺病毒或黑猩猩腺病毒。
8.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述腺病毒选自：AdHu5、AdHu4、AdHu7、AdHu11、AdHu26、AdHu55、AdC68、AdC3。
9.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述腺病毒为包含编码外源基因的重组腺病毒。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述腺病毒包含SARS-CoV-2的结构蛋白基因，所述结构蛋白选自：S蛋白、M蛋白、E蛋白、N蛋白中的一种或多种。
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