[发明专利]一种癌症检测抗体及其用途

说明书

本申请提供一种癌症检测抗体或其抗原结合片段。还提供编码该抗体或其抗原结合片段的核酸分子，以及用于表达该抗体或其抗原结合片段的表达载体、宿主细胞和方法。本申请还提供包含该抗体或其抗原结合片段的检测试剂盒，以及本申请抗体或其抗原结合片段、或检测试剂盒在癌症细胞/组织的体外检测中的用途。

技术领域

本申请涉及一种与人Claudin 18.2特异结合的抗体，其可以用于Claudin 18.2阳性细胞或组织的体外检测。

背景技术

Claudin是一类建立细胞旁屏障并控制细胞间分子流动的细胞表面蛋白家族((Singh et al.，(2010)J Oncol 2010：541957)，是紧密结合的必需成分，在保持上皮细胞极性、控制细胞旁扩散、以及调控细胞生长分化方面起到重要作用。现今在哺乳动物中已发现24个claudin成员，不同的成员在不同组织中表达，且其改变的功能与癌症形成相关联(Swisshelm et al.，(2005)Adv Drug Deliv Rev 57(6)：919-928)。

Claudin 18，又称CLD18，是四次跨膜蛋白，具有四个跨膜疏水区和两个胞外区。其以两种不同剪接变体存在，分别为Claudin 18.1和Claudin 18.2，两者仅在N端的第一跨膜区和第一胞外区处存在差异，而C端的蛋白质一级序列完全相同(见图1)。

Claudin 18.1选择性地在正常肺中表达，而Claudin 18.2在正常组织中的表达仅限于胃，具体为胃上皮的分化短寿细胞(Sahin et al.，(2008)Clin Cancer Res 14(23)：7624-7634)。此外，Claudin 18.2在大比例的原发胃癌及其转移癌中大量存在，并在其恶变中发挥重要作用。例如，在胰腺、食道、卵巢和肺肿瘤中发现有Claudin 18.2的频繁异位激活，还在胃癌、支气管癌、乳腺癌以及耳鼻喉癌中观察到Claudin 18.2表达(Niimi et al.，(2001)Mol Cell Biol 21(21)：7380-7390；Tanaka et al.(2011)J Histochem Cytochem59(10)：942-952；Micke et al.，(2014)Int J Cancer 135(9)：2206-2214；Shimobaba etal.(2016)Biochim Biophys Acta 1863(6 Pt A)：1170-1178；Singh et al.，(2017)JHematol Oncol 10(1)：105；Tokumitsu et al.，(2017)Cytopathology 28(2)：116-121)。临床上已开发出与Claudin 18.2特异结合的抗体来用于癌症的治疗。例如，Claudiximab(IMAB362)，一种由Ganymed开发的Claudin 18.2嵌合IgG1抗体，在治疗胃食道癌晚期的I期和II期临床试验中表现出鼓舞人心的效力(Sahin et al.，(2018)Eur J Cancer100：17-26)。

在治疗前，需要进行Claudin 18.2阳性患者的临床确诊。尽管好的Claudin 18.2治疗抗体不断被开发出来，Claudin 18.2体外检测抗体的开发却屡屡受挫。当Claudin18.1和Claudin 18.2在细胞上处于跨膜状态时，N端第一跨膜区和第一胞外区存在的少量氨基酸差异可能引起第一胞外区空间构象的不同，加上第一胞外区还可能与第二胞外区相互作用形成更复杂的结构，靶向胞外区的治疗抗体可以借助于此而在一定程度上区分Claudin 18.1和Claudin 18.2。而在进行体外检测时，疑似病理组织通常先进行石蜡切片或冷冻切片，后进行Claudin 18.2的免疫组化染色。切片过程、石蜡处理(包括石蜡包埋和脱石蜡)、切片脱水等步骤会不同程度地破坏Claudin 18.2的3D结构、甚至序列的完整性，使得切片上Claudin 18.1和Claudin 18.2的差异进一步缩小至数个氨基酸，从而让Claudin 18.1和Claudin 18.2的体外区分变得异常困难。