[发明专利]荧光原位杂交探针及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种荧光原位杂交探针的制备方法，其特征在于，包括步骤：

设计多条与目标核酸序列结合的杂交序列；通过质粒构建得到串联重复的标记序列；将所述杂交序列和所述标记序列的重复片段串联，之后将得到的产物回收并利用外切酶消化，得到单链DNA探针；将所述单链DNA探针进行标记，得到荧光原位杂交探针。

2.根据权利要求1所述的荧光原位杂交探针的制备方法，其特征在于：

所述多条为3-20条；所述杂交序列的长度为30-40bp。

3.根据权利要求1所述的荧光原位杂交探针的制备方法，其特征在于：

所述标记序列为能与序列特异性核酸结合蛋白结合的DNA序列。

4.根据权利要求1所述的荧光原位杂交探针的制备方法，其特征在于，

所述通过质粒构建得到串联重复的标记序列具体包括：在质粒上构建得到串联重复的标记序列，两个相邻的标记序列间隔为10-20bp，优选为15bp；串联重复序列以2段序列为基础，以一对同尾酶分别位于2段序列两端，另一限制性内切酶位于外围，通过同尾酶粘性末端连接，以此重复酶切连接，得到8-32段重复的标记序列。

5.根据权利要求1所述的荧光原位杂交探针的制备方法，其特征在于，

将所述杂交序列和所述标记序列的重复片段串联具体包括：通过修饰引物PCR用5’端携带所述杂交序列的修饰引物和另一反向引物以所述标记序列的突变体为模板，将所述杂交序列和所述标记序列的重复片段串联，所得片段在标记序列两端延长20bp以上。

6.根据权利要求1所述的荧光原位杂交探针的制备方法，其特征在于：

将得到的产物回收并利用外切酶消化具体为将得到的PCR产物回收并利用T5外切酶有限消化；

所述单链DNA探针为末端具有30-40nt单链DNA片段。

7.根据权利要求1所述的荧光原位杂交探针的制备方法，其特征在于，

将所述单链DNA探针进行荧光标记具体包括：将所述单链DNA探针与样品杂交后洗涤，再加入融合蛋白于37℃孵育30min，之后加入DAPI染色孵育5min即可；其中，所述融合蛋白是将结合蛋白与第一蛋白融合表达并纯化制备而得；所述第一蛋白为荧光蛋白和/或报告酶。

8.权利要求1-7任一项所述的方法制备得到的荧光原位杂交探针。

9.权利要求8所述的荧光原位杂交探针在制备用于荧光原位杂交检测产品中的应用。

10.一种荧光原位杂交检测试剂盒，其特征在于：

所述荧光原位杂交检测试剂盒包括权利要求8所述的荧光原位杂交探针。