[发明专利]一种用于肺癌早期诊断的外泌体ecDNA生物标志物检测试剂及其用途

说明书

本发明涉及一种用于肺癌早期诊断的外泌体ecDNA生物标志物检测试剂，该生物标志物包括外泌体ecDNA生物标志物C‑myc、EGFR和CyclinD1，作为预测早期肺癌的生物标志物。本发明首次提出并验证了外泌体ecDNA作为生物标志物表达水平用于肺癌早诊时具有快速、无伤害、高准确率、高特异性的优点，对于肺癌早期诊断具有重要意义。

技术领域

本发明涉及疾病早期检测技术领域，尤其涉及一种用于肺癌早期诊断的外泌体ecDNA生物标志物检测试剂。

背景技术

肺癌是世界范围内发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。肺癌早期病情隐匿，通常无任何症状，但大部分患者在初诊时已处于中晚期，失去了手术切除的机会。晚期肺癌患者的五年生存率不足5％，而早期肺癌患者的五年生存率可达90％以上。因此，早期诊断是肺癌患者获得良好预后的一个重要机会。

外泌体(exosome)是一种30-150nm大小、极低密度的细胞外纳米级囊状结构，由细胞经过“内吞-融合-外排”等一系列调控过程而形成。几乎所有细胞都会分泌外泌体，细胞分泌的外泌体携带了来源细胞的诸多生物学信息，因此，外泌体也被认为是重要的潜在生物标记物，可以及时的反映来源细胞的生理与病理状态。

ecDNA是近期肿瘤学领域的研究热点，ecDNA指的是从染色体上脱落以环状结构存在的DNA。研究表明ecDNA普遍存在于肿瘤细胞中，是生物标志物的载体，是肿瘤异质性的驱动力之一，会推动肿瘤的快速演化，并与肿瘤的发生、发展密切相关。

目前肺癌的早期诊断主要是根据早期临床症状、影像学、支气管镜活检以及痰液脱落细胞学等各方面配合进行诊断，但都具有其缺点和局限性。

肺癌在早期通常以肺结节的形式出现。利用影像学技术可以检测出肺结节发生。影像学是利用X射线的透射性与摄影效应使人体内部结构和器官形成影像。人体组织结构是由不同元素所组成，各种组织单位体积内各元素量总和的大小而有不同的密度。基于人体组织有密度和厚度的差别，密度高对X线吸收多，照片上呈白影；密度低X线吸收少，照片上呈黑影。从而通过成像了解人体解剖与生理功能状况以及病理变化，以达到诊断的目的。但采用影像学技术进行检测，受制于深浅组织的影像相互重叠和隐藏，有时需要多次多角度拍摄X光片才能清楚分辨，操作难度大，对人员专业水平要求很高；X射线能穿透人体组织，有可能使人体体液和组织细胞产生生理和生物化学改变，引起不同程度的损伤；采用影像学技术误漏诊率高、特异性差。

支气管镜检查是将细长的支气管镜经口或鼻置入患者的下呼吸道，即经过声门进入气管和支气管以及更远端，直接观察气管和支气管的病变，并根据病变进行相应的检查和治疗。大多数肺部及气道疾病，如肿瘤、间质性肺病、肉芽肿性疾病以及某些感染性疾病需要通过经支气管镜活检术来确定诊断，这是最常用的一项检查项目。但支气管镜活检属于“盲穿”，精准率偏低；实施过程中有穿刺到血管的危险，对病人有较大的风险。

咳嗽会产生强大的气流，会使肿瘤细胞更容易脱落和痰液一起被咳出，肺部脱落细胞学检查是肺癌早期诊断的重要方法之一。痰液细胞学检查就是将怀疑肺癌患者排出的痰液进行涂片，然后在显微镜下观察，根据涂片中细胞形态特点，检查癌前病变,恶性肿瘤细胞或癌细胞，做出初步的细胞类型诊断。但在实际使用中，样本采集要求较高，且仅能作为一种初步的定性诊断；由于诊断细胞学主要是观察细胞形态变化而看不到组织结构的改变，因此存在一定的局限性，易出现假阴性或假阳性。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明提出一种用于肺癌早期诊断的外泌体ecDNA生物标志物检测试剂，利用人血液或体液外泌体ecDNA作为生物标志物区分早期肺癌患者时具有快速、无伤害、高准确率、高特异性的优点，能够辅助肺癌早期诊断。

为实现以上目的，本发明所采用的技术方案包括：