[发明专利]一种用于肺癌早期诊断的外泌体ecDNA生物标志物检测试剂及其用途

权利要求书

1.一种用于肺癌早期诊断的外泌体ecDNA生物标志物检测试剂，其特征在于，所述检测试剂针对性检测的生物标志物包括外泌体ecDNA生物标志物，所述外泌体ecDNA生物标志物为C-myc、EGFR和CyclinD1的组合。

2.如权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述C-myc、EGFR和CyclinD1的外泌体ecDNA组合生物标志物在肺癌患者的外泌体中的表达值与在对照样本中的表达值相比具有统计学上的显著差异。

3.如权利要求2所述的检测试剂，其特征在于，所述对照样本为非肺癌患者样本。

4.一种用于肺癌早期诊断的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含有权利要求1至3任一项所述的检测试剂。

5.一种使用权利要求1至3任一项所述检测试剂在制备通过如下方法进行肺癌早期诊断的试剂盒中的用途，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

S1、采集疑似为肺癌患者的血液或体液样本，分离并纯化样本中的外泌体；

S2、分离并纯化外泌体中的ecDNA；

S3、对ecDNA生物标志物C-myc、EGFR和CyclinD1的组合进行表达检测和关联性分析。

6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述步骤S1包括使用含有沉淀剂和洗涤剂A的沉淀法分离并纯化样本中的外泌体；所述沉淀剂包括终浓度为10％至60％的PEG10000；所述洗涤液A包括终浓度为0.1至30mmol/L的KH₂PO₄和终浓度为0.3-28mmol/L的Na₂H₂PO₄。

7.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述所述沉淀剂包括终浓度为15％的PEG10000；所述洗涤液A包括终浓度为1mmol/L的KH₂PO₄和终浓度为4mmol/L的Na₂H₂PO₄。

8.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述步骤S2包括使用含有裂解液、洗涤液B、洗涤液C、洗脱液、磁珠悬液、蛋白酶K、外切酶、ATP和EDTA的磁珠法分离并纯化外泌体中的ecDNA；所述裂解液包括终浓度为1至5mol/L的异硫氰酸胍、终浓度为5至10mmol/L的柠檬酸钠、终浓度为0.01至1g/ml的Polidocanol和体积百分比为5至45％的乙醇；所述洗涤液B包括终浓度为0.1至5mol/L的异硫氰酸胍、终浓度为50至100mmol/L的Tris-HCl、体积百分比为0.5％至5％的Tween-20和体积百分比为30至80％的乙醇；所述洗涤液C包括终浓度为0.1至5mol/L的NaCl和终浓度为1至20mmol/L的Tris-HCl；所述洗脱液为终浓度5至20mmol/L、pH为8.5的Tris-HCL；所述磁珠悬液包括终浓度为1至30mg/mL且直径为300nm的硅羟基磁珠和体积百分比为10至50％的甘油；所述蛋白酶K包括终浓度为1至50mg/mL的Proteinase K和终浓度为10至50mmol/L的Tris-HCl；所述外切酶包含1至10units的核酸外切酶V。