[发明专利]一种AR-12对于MABC的体外抗菌活性的实验方法

说明书

本发明公开了一种AR‑12对于MABC的体外抗菌活性的实验方法，属于体外抗菌活性实验领域，包括以下步骤：进行药敏实验，准确称取一定量CAMH粉末，加入一定量的ddH₂O，振荡使其充分溶解，配制成2×CAMH培养液，将上述溶液在一定温度下高压灭菌处理一段时间；本发明设置了药敏实验、稳定实验等多个实验过程，可针对AR‑12对于MABC的体外抗菌活性进行全面实验，对于不同环境情况下，AR‑12对于MABC的体外抗菌活性的影响，大大提高了AR‑12对于MABC的体外抗菌活性的实验结果的精准度，且在实验方法内还设置有控制变量的对照实验步骤，将所有分析实验结果进行相互对照，可快速观察到变量带来的实验结果的变化，从而有效针对对于实验影像的因素进行发掘。

技术领域

本发明属于体外抗菌活性实验技术领域，尤其涉及一种AR-12对于MABC的体外抗菌活性的实验方法。

背景技术

据报道，AR-12除了具有最初的抗癌功能之外，还具有针对不同病原体的广泛生物活性。AR-12对多种病毒感染表现出体外抗病毒作用，包括腮腺炎病毒，拉萨病毒，寨卡病毒，流感病毒，麻疹病毒，HIV病毒(野生型和蛋白酶抗性)，登革热病毒、埃博拉病毒和出血热病毒等。AR-12还可以有效拮抗多种真菌，包括白色念珠菌，非白色念珠菌，皮肤芽孢杆菌，新隐球菌，荚膜组织胞浆菌和球孢子菌等。此外，AR-12还具有抑制利什曼原虫、多诺万等寄生虫的活性。最重要的是，AR-12目前被发现还具有抗菌活性，例如肠炎沙门氏菌，弗朗西斯菌，大肠杆菌和淋病奈瑟氏球菌等，显著遏制了体内和体外的细菌负荷。迄今为止，据报道AR-12的多效生物效应的机制基础与以下的因素和途径有关，主要包括三个方面：第一，伴侣机制：PKR样内质网激酶的活化(PERK)，内质网应激信号的上调，多种伴侣蛋白的调控(GRP78/BIP/HSPA5/DnaK等)，第二种激酶途径：抑制磷酸肌醇依赖性激酶(PDK1)活性，PI3k/Akt途径的抑制，乙酰辅酶A合成酶活性的降低，第三，自噬过程：强烈诱导凋亡和自噬，以及清除未折叠的蛋白质。然而，AR-12具有广谱抗病原体和抗肿瘤活性的确切机制仍不清楚，AR-12作为研究用新药(IND)，已获得美国食品药品监督管理局(FDA)的批准。目前，AR-12指定为可口服的小分子靶向抗癌药，已成功完成了35名针对35岁以上，患有晚期或复发性实体瘤或淋巴瘤患者的I期人类临床试验(临床试验注册编号NCT00978523)。此外，AR-12目前已被欧洲委员会批准用于临床隐球菌病(与氟康唑)和土拉菌病(与庆大霉素)的联合治疗。

最近，AR-12被发现可以有效杀灭某些革兰阴性菌，这是支持其广谱抗菌活性的另一个有力证据。因此，以上研究和临床经验表明，AR-12具有多种有利的药理学特性，这使得AR-12成为新型抗MABC治疗药物的有力候选者，因此需要一种对于AR-12对MABC临床菌株的体外抗菌活性实验方法。

发明内容

本发明的目的在于：为了解决对于AR-12对MABC临床菌株的体外抗菌活性的分析问题，而提出的一种AR-12对于MABC的体外抗菌活性的实验方法。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：一种AR-12对于MABC的体外抗菌活性的实验方法，包括以下步骤；

S1、进行药敏实验，准确称取一定量CAMH粉末，加入一定量的ddH₂O，振荡使其充分溶解，配制成2×CAMH培养液，将上述溶液在一定温度下高压灭菌处理一段时间；

S2、准确称取一定量AR-12粉末，加入一定量DMSO，振荡使其充分溶解，得到初始浓度的药物溶液，将一次性麦氏比浊管、麦氏比浊仪、96孔微孔板架等置于生物安全柜紫外线照射一段时间；

S3、按照倍比稀释原则在加样槽中将药物的浓度进行稀释，稀释后的浓度保持在一定范围，将液体培养至对数生长期的菌液从摇床取出，置于生物安全柜吸取少量菌液加入麦氏比浊管，加入适量生理盐水稀释菌液到一定麦氏浓度，分别吸取菌液和2×CAMH培养液加入加样槽，配制成菌悬液；