[发明专利]一种AR-12对于MABC的体外抗菌活性的实验方法

权利要求书

1.一种AR-12对于MABC的体外抗菌活性的实验方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1、进行药敏实验，准确称取一定量CAMH粉末，加入一定量的ddH₂O，振荡使其充分溶解，配制成2×CAMH培养液，将上述溶液在一定温度下高压灭菌处理一段时间；

S2、准确称取一定量AR-12粉末，加入一定量DMSO，振荡使其充分溶解，得到初始浓度的药物溶液，将一次性麦氏比浊管、麦氏比浊仪、96孔微孔板架等置于生物安全柜紫外线照射一段时间；

S3、按照倍比稀释原则在加样槽中将药物的浓度进行稀释，稀释后的浓度保持在一定范围，将液体培养至对数生长期的菌液从摇床取出，置于生物安全柜吸取少量菌液加入麦氏比浊管，加入适量生理盐水稀释菌液到一定麦氏浓度，分别吸取菌液和2×CAMH培养液加入加样槽，配制成菌悬液；

S4、分别吸取不同浓度的药物溶液和菌悬液加入96孔板，每列的第十二孔均不加药物溶液，作为阳性对照孔，加样结束后的药物的最终实验浓度在一定范围内；

S5、将加好样的96孔板进行封口，置于一定温度下的培养箱孵育一定时间，一段时间后进行MIC值读板，一段时间后再次进行MIC值读板；

S6、进行稳定性实验，准确称取一定量CAMH粉末，加入一定量的ddH₂O，振荡使其充分溶解，配制成2×CAMH培养液，将上述溶液在一定温度下高压灭菌处理一段时间；

S7、准确称取一定量AR-12粉末，加入一定量DMSO，振荡使其充分溶解，得到初始浓度的药物溶液，将一次性麦氏比浊管、麦氏比浊仪、96孔微孔板架等置于生物安全柜紫外线照射一段时间；

S8、按照倍比稀释原则在加样槽中将药物的浓度进行稀释，稀释后的浓度保持在一定范围，分别吸取不同浓度的药物溶液加入96孔微量测定板，每列的第十二孔均不加药物溶液，作为阳性对照孔，将加入药物溶液的96孔板在一定温度下分别预孵育一定天数；

S9、将液体培养至对数生长期的菌液从摇床取出，置于生物安全柜，吸取少量菌液加入麦氏比浊管，加入适量生理盐水稀释菌液到一定麦氏浓度；

S10、吸取50μl菌悬液加入96孔板，加样结束后的药物的最终实验浓度在一定范围，将加好样的96孔板进行封口，置于一定温度下培养箱孵育一段时间，一段时间后进行MIC值读板。

2.根据权利要求1所述的一种AR-12对于MABC的体外抗菌活性的实验方法，其特征在于，所述S1和S6中，称取CAMH粉末8.8g，加入200ml的ddH₂O，在121℃高压灭菌处理30分钟。

3.根据权利要求1所述的一种AR-12对于MABC的体外抗菌活性的实验方法，其特征在于，所述S2和S7中，称取AR-12粉末5mg，加入1ml的DMSO，初始浓度为5000μg/ml的药物溶液，紫外线照射30分钟。

4.根据权利要求1所述的一种AR-12对于MABC的体外抗菌活性的实验方法，其特征在于，所述S3中，稀释后的浓度范围为0.016-32μg/mL，分别吸取20μl菌液和2000μl的2×CAMH培养液。

5.根据权利要求1所述的一种AR-12对于MABC的体外抗菌活性的实验方法，其特征在于，所述S4中，分别吸取50μl不同浓度的药物溶液和菌悬液，最终实验浓度范围为0.008-16μg/mL。

6.根据权利要求1所述的一种AR-12对于MABC的体外抗菌活性的实验方法，其特征在于，所述S5中，置于37℃培养箱孵育14天，3天后进行MIC值读板，14天后再次进行MIC值读板。

7.根据权利要求1所述的一种AR-12对于MABC的体外抗菌活性的实验方法，其特征在于，所述S8中，吸取50μl不同浓度的药物溶液，在30℃分别预孵育0、3、7和14天。

8.根据权利要求1所述的一种AR-12对于MABC的体外抗菌活性的实验方法，其特征在于，所述S3和S9中，加入适量生理盐水稀释菌液到0.5个麦氏浓度。

9.根据权利要求1所述的一种AR-12对于MABC的体外抗菌活性的实验方法，其特征在于，所述S10中，吸取50μl菌悬液加入96孔板，最终实验浓度范围为0.008-16μg/mL，将加好样的96孔板进行封口，置于37℃培养箱孵育3天，3天后进行MIC值读板。