[发明专利]一种肠道病毒通用型核酸检测试剂盒

说明书

本发明的一种肠道病毒通用型核酸检测试剂盒及其使用方法，试剂盒包括核酸扩增反应液、酶混合液、肠道病毒通用型反应液、阳性对照和阴性对照，所述肠道病毒通用型反应液设有内参。阳性对照参与提取和RT‑PCR扩增的过程，监控提取和扩增过程。内参可用于对样本采集、保存和运输以及核酸提取过程进行监控，避免假阴性判读结果的出现。

技术领域

本发明属于核酸检测技术领域，具体来说是一种肠道病毒通用型核酸检测试剂盒。

背景技术

肠道病毒属于小RNA病毒科肠道病毒属，能引起人类致病的肠道病毒有多种，引起的主要疾病有手足口病、无菌性脑膜炎等。手足口病5岁以下儿童为主，尤以3岁以下儿童发病率最高，该病流行无明显的地区性，全年均可发生，一般5-7月为发病高峰。引起手足口病的肠道病毒包括柯萨奇病毒A组的2、4、5、6、7、9、10、16型等，B组的1、2、3、4、5型等，肠道病毒71型及埃可病毒等。由于这些病毒引起的症状和流行特点相似，仅靠临床症状对病原进行区分非常不可靠，实验室诊断方法有病毒分离、抗原检测与核酸检测等。

经过检索，中国发明专利：一种肠道病毒通用型核酸检测试剂盒及其检测方法(申请号为201010105091.7，申请日为2010.02.02)，该申请案试剂盒含有：PCR反应酶，其中包括热启动Taq酶、MLV逆转录酶、RNA酶抑制剂；PCR反应液，其中包括DEPC处理水、dNTPs、10×PCRBuffer、肠道病毒通用型正向引物、肠道病毒通用型反向引物、肠道病毒通用型探针；肠道病毒通用型正向引物序列为：5’-GTGTCGTAAYGGGYAACTCTGCA-3’，肠道病毒通用型反向引物序列为：5’-YAATTGTCACCATAAGCAGCCA-3’，肠道病毒通用型探针序列为：5’-TAGAACCGACTACTTACGGTGTCCGT-3’；阴性质控品，为DEPC处理水；阳性质控品，为制备的体外转录RNA。采用实时荧光定量PCR技术检测总肠道病毒核酸序列的方法，具有特异、灵敏、快速、操作简便的优点。但是该申请案的不足之处在于没有设置内参，对于反应的质量难以把控。

发明内容

1.发明要解决的技术问题

本发明的目的在于解决现有的肠道病毒核酸检测试剂盒没有设置内参，对于反应的质量难以把控的问题。

2.技术方案

为达到上述目的，本发明提供的技术方案为：

本发明的一种肠道病毒通用型核酸检测试剂盒，包括核酸扩增反应液、酶混合液、肠道病毒通用型反应液、阳性对照和阴性对照，所述肠道病毒通用型反应液设有内参。

优选的，所述核酸扩增反应液包括核苷酸混合液、Buffer、MgCl₂溶液和DEPC水。

优选的，所述酶混合液包括UNG酶5U/μL、DNA聚合酶2.5U/μL、逆转录酶200U/μL、RNA酶抑制剂40U/μL和酶稀释液。

优选的，所述肠道病毒通用型反应液包括肠道病毒通用型上游引物、肠道病毒通用型下游引物、肠道病毒通用型探针、内参RNase P上游引物、内参RNase P下游引物、内参RNase P探针和DEPC水。

优选的，所述阳性对照包括肠道病毒通用型病毒样颗粒、RNase P病毒样颗粒和TEBuffer，所述阴性对照为0.9％的氯化钠溶液。

优选的，所述肠道病毒通用型上游引物序列为CTTTGGGTGTCCGTGTTTCC，肠道病毒通用型下游引物序列为GGCCAATCCAATAGCTATATGG，肠道病毒通用型探针序列为AATTCTTTAATTGTCACCATAAGCAGCCAATA。