[发明专利]犬细小病毒检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种犬细小病毒检测试剂盒，包括试纸条以及标记管，所述试纸条包括样品垫、反应膜、吸水垫，所述反应膜上设有相互间隔的检测线及质控线，所述检测线较所述质控线更靠近所述样品垫，所述标记管的内表面上负载有分别用荧光微球标记的第一犬细小病毒单克隆抗体和质控抗体，所述检测线包被有第二犬细小病毒单克隆抗体，所述第一犬细小病毒单克隆抗体和所述第二犬细小病毒单克隆抗体分别识别犬细小病毒的不同抗原表位，所述质控线包被有能够与所述质控抗体特异性结合的抗原。

技术领域

本发明涉及病毒检测技术领域，特别是涉及犬细小病毒检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

犬细小病毒最早是从患肠炎的病犬粪便中分离获得的病毒，该病毒属于细小病毒科，细小病毒属。病毒进入健康犬的消化道进行感染后，主要攻击肠上皮细胞和心肌细胞，出现呕吐、腹泻、精神不振、脱水、发热等临床症状，其感染性极强，致死率较高。犬是主要的宿主，随着病毒抗原的漂移，狐狸、水貂、猫和郊狼等也会被感染。近年来宠物市场不断扩大和发展，犬成为最受人类喜爱的家庭宠物之一，其健康状况往往与人类自身的健康状况息息相关，关注宠物犬的健康对于动物福利和人类健康具有重要的公共卫生意义。犬细小病毒是我国养犬业最为严重的传染病之一，该病既影响着家养宠物的生命健康，又危害着我国养犬业、毛皮动物养殖业及野生动物保护业的发展。目前细小病毒检测方法主要有血凝抑制试验(HI)、核酸检测、酶联免疫(ELISA)和胶体金法。

血凝抑制试验(HI)样本要求较高需要新鲜的红细胞，且人为操作对实验结果影响较大，目前只适用于个别实验室，还无法工业化批量生产，将其推广到宠物医院临床一线检测需要很长一段时间。核酸检测需要配备一整套精密的检测设备，这对于小宠物医院价格是较为昂贵的。酶联免疫(ELISA)检测过程繁琐，耗时较长，所需仪器设备体积较大且需要配备专业技术人员，这对于小型宠物医院和野外考察即时检测不适用。胶体金法灵敏度低、重复性差，只能区分阴阳，无法进行定量检测。

中国专利201820862282.X公开了一种犬细小病毒免疫荧光检测试剂，所诉检测试剂包括一检测卡(侧流片)和一卡盒，该检测卡包括背衬以及位于背衬上的样品垫，荧光乳胶垫，检测区，质控区，硝酸纤维素膜，吸收垫，荧光乳胶垫包被有荧光乳胶标记的犬细小病毒抗体-1；并且检测区包被有犬细小病毒抗体-2，质控区包被有能结合犬细小病毒抗体-1的羊抗鼠IgG二抗。其缺点为：当待测样本中所含犬细小病毒抗原浓度较高时，将在检测线处聚集大量的荧光胶乳微球，从而影响质控线的检测，当待测样本中所含犬细小病毒抗原浓度较低时，将在质控线处聚集大量的荧光胶乳微球，从而影响整体的T/C值，即检测线与质控线使用同一检测系统，可能会影响检测的特异性、灵敏度和检测上限。

发明内容

基于此，有必要针对传统检测犬细小病毒的检测特异性差、灵敏度差的问题，提供一种能够实现快速、精准检测的犬细小病毒检测试剂盒及其制备方法。

一种犬细小病毒检测试剂盒，包括试纸条以及标记管，所述试纸条包括样品垫、反应膜、吸水垫，所述反应膜上设有相互间隔的检测线及质控线，所述检测线较所述质控线更靠近所述样品垫，所述标记管的内表面上负载有分别用荧光微球标记的第一犬细小病毒单克隆抗体和质控抗体，所述检测线包被有第二犬细小病毒单克隆抗体，所述第一犬细小病毒单克隆抗体和所述第二犬细小病毒单克隆抗体分别识别犬细小病毒的不同抗原表位，所述质控线包被有能够与所述质控抗体特异性结合的抗原。

在其中一个实施例中，所述第一犬细小病毒单克隆抗体和所述质控抗体均匀分布在所述标记管的内表面。

在其中一个实施例中，以所述标记管的内表面面积计算，所述标记管的内表面包被的所述第一犬细小病毒单克隆抗体的浓度为20ng/cm²～200ng/cm²，所述质控抗体的浓度为2ng/cm²～20ng/cm²。

在其中一个实施例中，所述标记管的内表面上负载有海藻糖、吐温80和甘氨酸。