[发明专利]一种用于构建先天性黑蒙症克隆猪核供体细胞的CRISPR/Cas9系统及其应用有效
| 申请号： | 202011178268.6 | 申请日： | 2020-10-29 |
| 公开（公告）号： | CN112522292B | 公开（公告）日： | 2023-05-02 |
| 发明（设计）人： | 牛冬;汪滔;陶裴裴;曾为俊;王磊;程锐;马翔;赵泽英;刘璐;黄彩云 | 申请（专利权）人： | 南京启真基因工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/55 | 分类号： | C12N15/55;C12N15/113;C12N15/85;C12N15/90;C12N15/65;C12N5/10 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 傅婷婷;徐冬涛 |
| 地址： | 211306 江苏省南京市高淳区经*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 构建 先天性 黑蒙症 克隆 供体 细胞 crispr cas9 系统 及其 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种用于猪RPE65基因编辑的CRISPR/Cas9系统，其特征在于包含Cas9表达载体和针对猪RPE65基因的gRNA表达载体；所述的Cas9表达载体的质粒全序列如SEQ ID NO.1所示；所述的针对猪RPE65基因的gRNA表达载体含有猪RPE65基因靶点的gRNA序列，载体骨架为pKG-U6gRNA，质粒全序列如SEQ ID NO.3所示，所述的猪RPE65基因靶点的gRNA序列由SEQID NO.23和SEQ ID NO.24所示互补DNA oligo组成；所述的针对猪RPE65基因的gRNA表达载体和Cas9表达载体的摩尔比为3:1。
2.权利要求1所述的CRISPR/Cas9系统在构建猪RPE65基因敲除的猪重组细胞中的应用。
3.一种猪RPE65基因敲除的重组细胞，其特征在于由权利要求1所述的CRISPR/Cas9系统共转染猪原代成纤维细胞经验证后所得。
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