[发明专利]菌丝培养方法及利用其制备和再生原生质体的方法

权利要求书

1.菌丝培养方法，其特征在于，包括如下步骤：将无菌玻璃纸放置于固体培养基的表面上，后将菌丝块接种于所述无菌玻璃纸上，培养，所得菌丝体直接用于原生质体制备。

2.桦褐孔菌原生质体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一、将无菌玻璃纸平铺在PDA培养基平板上，将桦褐孔菌菌丝接接种于所述无菌玻璃纸上，培养6-10天；

步骤二、从所述无菌玻璃纸上刮取到培养好的桦褐孔菌菌丝体，酶解分离得到桦褐孔菌原生质体。

3.如权利要求2所述的桦褐孔菌原生质体的制备方法，其特征在于，步骤一中，获取所述桦褐孔菌菌丝的方法包括如下步骤：

已长满桦褐孔菌的PDA培养基平板边缘生长的菌丝用打孔器打孔获取到带有桦褐孔菌菌丝的块状物，将所述块状物接种于所述无菌玻璃纸上。

4.如权利要求2所述的桦褐孔菌原生质体的制备方法，其特征在于，步骤二中，酶解的方法包括如下步骤：

将培养好的桦褐孔菌菌丝体刮取，加入混合酶解液后于温度32-35℃和转动条件100rpm下，酶解3-4h。

5.如权利要求4所述的桦褐孔菌原生质体的制备方法，其特征在于，所述混合酶解液包括质量比1-3:1的溶壁酶和蜗牛酶，混合酶解液的浓度为20-30mg/ml。

6.如权利要求4所述的桦褐孔菌原生质体的制备方法，其特征在于，步骤二中，分离的方法包括如下步骤：

所得酶解液通过若干层擦镜纸过滤后离心，沉淀即为所述桦褐孔菌原生质体。

7.如权利要求5所述的桦褐孔菌原生质体的制备方法，其特征在于，步骤二中，采用渗透压稳定剂溶液溶解溶壁酶和蜗牛酶形成所述混合酶解液。

8.如权利要求7所述的桦褐孔菌原生质体的制备方法，其特征在于，所述渗透压稳定剂为浓度0.6M的MgSO₄溶液。

9.桦褐孔菌原生质体的再生方法，其特征在于，包括如下步骤：

将原生质体涂布于再生培养基上进行再生培养；

所述再生培养基包含如下浓度的组分：土豆200g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨2g/L，酵母提取物4g/L，MgSO₄ 0.5g/L，KH₂PO₄ 0.5g/L，琼脂粉15-20g/L，渗透压稳定剂作为溶剂，定容至1000mL，pH自然；

所述渗透压稳定剂为浓度0.6M的MgSO₄溶液。