[发明专利]一种双脱毒苹果苗的培育方法

说明书

本发明涉及苹果栽培领域，提供了一种双脱毒苹果苗的培育方法，包括：S1.脱毒砧木苗和目标品种苗的制备；S2.对脱毒砧木苗和目标品种苗进行生根、驯化和移栽培养；其中，脱毒的砧木苗在驯化中移栽至苗圃中，脱毒的目标品种苗在驯化中移栽至营养钵中；S3.双脱毒苹果苗的嫁接及培养；其中，步骤S1包括外植体的预处理、茎尖培养、多次高温钝化和增值培养及脱毒检测，且步骤S1对砧木和目标品种进行同时处理；综上，将脱毒处理后的砧木与品种进行嫁接，获得所需要的双脱毒苗，以此有效实现苗木无毒，抑制土壤土传性病害的传播，并增对强土传根茎腐烂病、根朽病等病害的抗性，进而能减少农药的使用，为生产绿色无公害水果创造条件。

技术领域

本发明涉及苹果栽培领域，特别涉及一种双脱毒苹果苗的培育方法。

背景技术

苹果，属于蔷薇科大宗水果，不仅是我国最主要的果品，也是世界上种植最广、产量最多的果品；其味道酸甜适口，营养丰富。

在现有苹果种植中存在苗木品种老化、根系欠发达、病虫害严重、结果率不高等问题。各国研究表明大多数苹果栽培品种，都感染一种或者数种病毒，其中以苹果褪绿叶斑病毒、苹果茎痘病毒和苹果茎沟病毒分布最广，危害性最大。虽然现有的技术已经研究出各种脱毒苹果苗，但分析我国苹果产业的种苗供应体系及商业化市场，不难看出，国内大量使用传统嫁接苗，而目前市场的脱毒苹果苗只是进行了品种脱毒处理，而对于所嫁接的砧木并未脱毒，在此情况下，由于砧木根系带毒，使得脱毒苹果苗还会继续侵染病毒，难以真正实现苗木无毒；

综上可知，需要进一步培育出双脱毒的苹果苗。

发明内容

鉴于此，在本发明中提供一种双脱毒苹果苗的培育方法，以实现砧木和品种的双脱毒培育。

本发明所述的一种双脱毒苹果苗的培育方法，包括如下步骤：

S1.脱毒砧木苗和目标品种苗的制备

外植体的预处理：在夏季晴天午后2点-3点，选取目标砧木上半木质化茎段作为砧木组培用外植体，选取目标苹果品种的幼嫩枝条作为品种组培用外植体，采取体积浓度75％酒精和质量浓度为0.1％升汞配合使用的方式对砧木和品种的组培用外植体进行间隔2天的两次体外消毒，消毒后均置入4℃的冰箱中冷藏20-30天；

茎尖培养：将冷藏后的组培用外植体接种在第一接种培养基中培养12-15天至发芽，发芽后截取1.5-2cm的芽体，接种于第二接种培养基上培养；

初次高温钝化：将上述第二接种培养基置入38℃-40℃的光照培养箱中培养1个月，进行高温钝化，然后剥离芽尖0.2-1.0mm接入第三接种培养基中培养；

二次高温钝化：将上述第三接种培养基再次置入上述光照培养箱中培养30-45天；

增值培养及脱毒检测：将二次高温钝化培养后生长的新芽割下，并接种于增值培养基中，在25℃、光照时长12小时、光照强度6000LX的条件下增值培养20-30天，获得脱毒的砧木苗和目标品种苗，并对脱毒苗进行病毒检测及鉴定；

S2.对脱毒砧木苗和目标品种苗进行生根、驯化和移栽培养；其中，脱毒的砧木苗在驯化中移栽至苗圃中，脱毒的目标品种苗在驯化中移栽至营养钵中；

S3.双脱毒苹果苗的嫁接及培养

嫁接：取脱毒目标品种苗的1-3cm嫩芽，消毒后经6-BA进行预处理；取健壮的脱毒砧木苗，并对其顶端和根端进行切除，留茎长2cm、根长4-5cm，然后在距顶端3-4mm处嫁接预处理后的脱毒目标品种苗的嫩芽；

培养：将嫁接好的苗放入第一嫁接培养基中，在25℃、光照时长16小时、光照强度2000LX的条件下培养6-7天，然后转入第二嫁接培养基中继续培养，获得双脱毒苗。

进一步地，在外植体的预处理步骤中，所截取的半木质化茎段为5-15cm。