[发明专利]一种双脱毒苹果苗的培育方法

权利要求书

1.一种双脱毒苹果苗的培育方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.脱毒砧木苗和目标品种苗的制备

外植体的预处理：在夏季晴天午后2点-3点，选取目标砧木上半木质化茎段作为砧木组培用外植体，选取目标苹果品种的幼嫩枝条作为品种组培用外植体，采取体积浓度75％酒精和质量浓度为0.1％升汞配合使用的方式对砧木和品种的组培用外植体进行间隔2天的两次体外消毒，消毒后均置入4℃的冰箱中冷藏20-30天；

茎尖培养：将冷藏后的组培用外植体接种在第一接种培养基中培养12-15天至发芽，发芽后截取1.5-2cm的芽体，接种于第二接种培养基上培养；

初次高温钝化：将上述第二接种培养基置入38℃-40℃的光照培养箱中培养1个月，进行高温钝化，然后剥离芽尖0.2-1.0mm接入第三接种培养基中培养；

二次高温钝化：将上述第三接种培养基再次置入上述光照培养箱中培养30-45天；

增值培养及脱毒检测：将二次高温钝化培养后生长的新芽割下，并接种于增值培养基中，在25℃、光照时长12小时、光照强度6000LX的条件下增值培养20-30天，获得脱毒的砧木苗和目标品种苗，并对脱毒苗进行病毒检测及鉴定；

S2.对脱毒砧木苗和目标品种苗进行生根、驯化和移栽培养；其中，脱毒的砧木苗在驯化中移栽至苗圃中，脱毒的目标品种苗在驯化中移栽至营养钵中；

S3.双脱毒苹果苗的嫁接及培养

嫁接：取脱毒目标品种苗的1-3cm嫩芽，消毒后经6-BA进行预处理；取健壮的脱毒砧木苗，并对其顶端和根端进行切除，留茎长2cm、根长4-5cm，然后在距顶端3-4mm处嫁接预处理后的脱毒目标品种苗的嫩芽；

培养：将嫁接好的苗放入第一嫁接培养基中，在25℃、光照时长16小时、光照强度2000LX的条件下培养6-7天，然后转入第二嫁接培养基中继续培养，获得双脱毒苗。

2.如权利要求1所述的一种双脱毒苹果苗的培育方法，其特征在于：在外植体的预处理步骤中，所截取的半木质化茎段为5-15cm。

3.如权利要求1所述的一种双脱毒苹果苗的培育方法，其特征在于，所述第一/第二/第三接种培养基均为：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.3mg/L+GA₃0.1mg/L+CH200mg/L。

4.如权利要求1所述的一种双脱毒苹果苗的培育方法，其特征在于，所述增值培养基为：MT+蔗糖35mg/L+6-BA0.1mg/L+IBA0.05mg/L+GA₃0.03mg/L+CH200mg/L。

5.如权利要求1所述的一种双脱毒苹果苗的培育方法，其特征在于，所述第一嫁接培养基为1/2MT+蔗糖35g/L，PH为5.7-5.9；所述第二嫁接培养基为1/2MT+蔗糖30g/L+GA₃0.5mg/L，PH为5.8-5.9。

6.如权利要求1所述的一种双脱毒苹果苗的培育方法，其特征在于，在步骤S2中，对脱毒砧木苗和目标品种苗进行生根、驯化和移栽培养包括：

生根培养：将成功通过病毒检测及鉴定的脱毒苗进行至少一次继代培养，然后转移至生根培养基中进行20-30天的生根培养；

温室驯化及移栽：将经生根培养的脱毒苗转移至温室大棚内，覆膜遮阴，5天后将脱毒苗移栽至穴盘中，在逐渐增加光照和通风时间的条件下继续驯化5-10天，然后将脱毒的砧木苗移栽至苗圃中、脱毒的目标品种苗移栽至营养钵中，并继续增加光照和通风时间，直至完全适应外界环境。

7.如权利要求6所述的一种双脱毒苹果苗的培育方法，其特征在于，所述生根培养基为：MS+NAA0.5mg/L。

8.如权利要求1所述的一种双脱毒苹果苗的培育方法，其特征在于，在步骤S3中，对脱毒目标品种苗的嫩芽进行消毒时包括：

将嫩芽置入2％NaClO内，进行震荡消毒，且消毒时间为7min；

消毒后，用无菌水冲洗4-5次。