[发明专利]一种猪链球菌疫苗重组蛋白GSE及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种用作猪链球菌疫苗的重组蛋白GSE，所述重组蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.1。针对猪链球菌病的灭活苗和弱毒苗型间交叉保护效果并不好，且存在一定的生物安全性问题，本发明基于猪链球菌保护性抗原表位的筛选，设计而成的重组蛋白能够用于猪链球菌病疫苗的制备中，本发明提供的这种重组蛋白可在安全的条件下高效制备，具有良好的实用性。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其是一种猪链球菌疫苗重组蛋白GSE及其制备方法和应用。

背景技术

猪链球菌(Streptococcus suis)对养猪业来说是一个非常值得重视的细菌性传染病病原，如果发生疫情可能造成巨大的经济损失，猪链球菌可引起猪的脑膜炎、关节炎、败血症、心内膜炎、脑炎、流产、多发性浆膜炎和支气管肺炎等疾病，发病致死率高达80％。1990年和2005年我国发生了大规模暴发，再一次提醒人们要增强对该病的重视程度。

由于猪链球菌血清型众多，使得在这种病的预防阶段灭活苗的型间交叉保护效果并不好。目前的疫苗研究更倾向于亚单位疫苗的开发，有研究者发现2个及以上的毒力因子或免疫原性蛋白串联构建的亚单位疫苗可以很好地增强免疫保护效果，使针对这种细菌病的亚单位疫苗的研究进入了新阶段。

本发明中涉及的三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、烯醇化酶(Enolase)、DNA核酸酶(SsnA)是3种重要的猪链球菌保护性抗原。已有研究证实这些保护性抗原具有良好的免疫保护作用，但目前还没有研究者将这3种抗原结合，从中选取抗原表位，设计重组蛋白用于猪链球菌病的疫苗。

通过检索，尚未发现如下与本发明申请相关的专利公开文献。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种猪链球菌疫苗重组蛋白GSE及其制备方法和应用。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种用作猪链球菌疫苗的重组蛋白GSE，所述重组蛋白的氨基酸序列为SEQ IDNO.1。

编码如上所述的重组蛋白的核苷酸序列为SEQ ID NO.2。

如上所述的重组蛋白的制备方法，包括如下步骤：

⑴B细胞和辅助T细胞抗原表位筛选；

⑵B细胞和辅助T细胞抗原表位串联基因设计及质粒构建；

⑶重组蛋白的原核表达和纯化，即得猪链球菌疫苗重组蛋白GSE。

而且，所述步骤⑴的具体方法为：根据猪链球菌三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、烯醇化酶(Enolase)、DNA核酸酶(SsnA)的氨基酸序列，应用生物信息学软件，分析蛋白质一级结构，在抗原表位筛选时排除跨膜区域和信号肽区域，而后预测B细胞和辅助T细胞抗原表位，最后分析蛋白质的二级结构以进一步验证筛选出的抗原表位是否处于抗原性和亲水性的区域。

而且，所述分析蛋白质一级结构所用方法为TMHMM工具和SignalP工具，预测B细胞抗原表位采用ABCpred和BepiPred方法，预测辅助T细胞抗原表位采用在线工具RANKPEP和SYFPEITHI，分析蛋白质的二级结构则使用SOPMA和DNASTAR软件。

而且，所述步骤⑵的具体方法为：将步骤⑴获得的所述B细胞和辅助T细胞表位的片段，按GAPDH-SsnA-Enolase的顺序依次进行拼接，完成后在重组多肽的N端添加树突状细胞靶向肽序列，各片段间用4个甘氨酸(GGGG)短肽进行分割，完成重组蛋白氨基酸序列的设计；最后在序列两端添加酶切位点，获得编码所述重组蛋白GSE的核苷酸序列，进而构建包含目的基因的重组原核表达载体。

而且，添加的树突状细胞靶向肽序列为SEQ ID NO.3：FYPSYHSTPQRP；