[发明专利]一种大豆褐斑病病原菌QoI杀菌剂抗性的快速检测方法

权利要求书

1.一种大豆褐斑病病原菌QoI杀菌剂抗性的快速检测方法，其特征在于，首先分离培养大豆褐斑病病原菌，前处理后提取其基因组DNA，PCR扩增其细胞色素b基因序列，之后使用错配扩增突变分析PCR技术，利用设计的特异性引物检测扩增得到的细胞色素b基因中的抗性突变；所述培养大豆褐斑病病原菌的具体步骤为：大豆壳真孢菌株在添加利福平的V8培养基上25℃培养2天，然后在光照12 h，黑暗12 h的光照条件下培养5天；所述的前处理的方法为：将从V8-琼脂表面取出的7天龄的菌丝体和分生孢子转移到含有720 µL CLS-VF，80 µL浓度为1 mg/µLPVP和200 µL PPS的2mL裂解基质a管中，使用匀浆器以6.0速度匀浆2次，每次30s；所述的抗性突变为G143A；所述的PCR扩增引物为SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.2所示的引物；所述的特异性引物为SEQ ID NO.3-SEQ ID NO.10所示的引物；所述的错配扩增突变分析PCR程序为95℃5 min，然后95℃15 s，45-62℃30 s，72℃20 s，循环38次，最后在72℃下延长10分钟。

2.一种权利要求1所述的大豆褐斑病病原菌QoI杀菌剂抗性的快速检测方法在检测大豆褐斑病病原菌QoI抗性中的应用。