[发明专利]纳米工程化神经母细胞瘤细胞的构建方法

说明书

本发明公开了一种纳米工程化神经母细胞瘤细胞的构建方法。该方法主要利用药物负载技术和细胞膜展示技术，将神经母细胞瘤细胞内容物负载到锆基金属有机框架材料内，将神经母细胞瘤细胞膜装载到锆基金属有机框架材料表面上。该方法在破坏神经母细胞瘤细胞完整性，避免材料在体内成瘤的同时，使细胞膜和细胞内容物先后发挥作用，保持了神经母细胞瘤细胞的结构特性，并将细胞纳米化，提高生物相容性。该方法所构建出的纳米材料，在促进烧伤后伤口皮肤组织再生的同时，还能够促进毛囊再生，还原皮肤的原始结构，有望发展成为更有效治疗严重烧伤的新型生物材料。

技术领域

本发明属于材料科学技术领域，提供了一种纳米工程化神经母细胞瘤细胞的构建方法。

背景技术

肿瘤细胞可以创造免疫微环境，包括肿瘤相关巨噬细胞，调节性T细胞等，促进损伤后再生。神经母细胞瘤细胞高表达声波刺猬，在皮肤中，声波刺猬是胚胎发育过程中毛囊形态发生以及调节成年卵泡生长和循环所必需的。声波刺猬促进Wnt激活的干细胞及其他具有分化潜能的细胞转化为真皮乳头，从而促进毛囊再生。但只有破坏肿瘤细胞的完整性，才能利用其再生特性，而不造成体内成瘤。

锆基金属有机框架（NU-801）具有热响应性，可以通过在其外部包裹聚多巴胺，显示出在NIR照射下内容物释放。

细胞膜包被的纳米颗粒是一类新型的仿生纳米系统，它将细胞膜的功能和合成纳米材料的功能灵活性结合在一起，可有效地进行药物输送并提供新颖的治疗方法。

利用NU-801将神经母细胞瘤的细胞膜与细胞质隔离开，既可以达到序列治疗作用，即先创造利于再生的免疫微环境，再NIR照射释放细胞内容物，促进皮肤和毛囊的再生，又可以避免肿瘤细胞的体内成瘤。该纳米材料还原了烧伤部位皮肤的原始结构，有望发展成为更有效治疗严重烧伤的新型生物材料。

发明内容

本发明目的在于提供一种纳米工程化神经母细胞瘤细胞的构建方法，具体是指一种促进烧伤后毛囊再生的纳米工程化神经母细胞瘤细胞的构建方法，通过药物负载技术和细胞膜展示技术还原细胞原始结构。

为实现上述目的，本发明提供的技术方案如下：

利用药物负载技术和细胞膜展示技术，将神经母细胞瘤细胞内容物负载到NU-801内，将神经母细胞瘤细胞膜装载到NU-801表面，制备得到纳米工程化神经母细胞瘤细胞。

本发明提供的一种纳米工程化神经母细胞瘤细胞的构建方法，其特征在于：利用超声破碎法和差速离心法分离神经母细胞瘤细胞膜和细胞内容物，构建锆基金属有机框架NU-801，将NU-801浸泡在细胞内容物溶液中，离心纯化，用水洗涤，再利用多巴胺聚合过程将细胞膜及聚多巴胺覆盖在含细胞内容物的NU-801表面，离心纯化，得到纳米工程化神经母细胞瘤细胞。

作为优选方案，在NIR条件下，所述纳米工程化神经母细胞瘤细胞逐渐降解，释放细胞内容物。

进一步地，所述复合纳米材料的平均粒径为800nm～1000nm。

更进一步地，具体步骤如下：

1、分离神经母细胞瘤细胞细胞膜和细胞内容物：

将神经母细胞瘤细胞悬液收集到50ml离心管中，在冰上超声破碎细胞，超声器设置为：振幅35%，总时间20分钟，间隔时间5秒开3秒关，4℃4000rpm离心5分钟，取上清，4℃20000g离心30分钟，沉淀收集为细胞内容物，上清10℃25000rpm离心2小时，收集上清加入细胞内容物中，沉淀为细胞膜。

2、构建锆基金属有机框架NU-801：