[发明专利]纳米工程化神经母细胞瘤细胞的构建方法

权利要求书

1.一种纳米工程化神经母细胞瘤细胞的构建方法，其特征在于：利用超声破碎法和差速离心法分离神经母细胞瘤细胞膜和细胞内容物，构建锆基金属有机框架NU-801，将NU-801浸泡在细胞内容物溶液中，离心纯化，用水洗涤，再利用多巴胺聚合过程将细胞膜及聚多巴胺覆盖在含细胞内容物的NU-801表面，离心纯化，得到纳米工程化神经母细胞瘤细胞。

2.根据权利要求1所述纳米工程化神经母细胞瘤细胞的构建方法，其特征在于：在NIR条件下，所述纳米工程化神经母细胞瘤细胞逐渐降解，释放细胞内容物。

3.根据权利要求1或2所述纳米工程化神经母细胞瘤细胞的构建方法，其特征在于：该方法具体步骤如下：

S1：分离神经母细胞瘤细胞细胞膜和细胞内容物：

将神经母细胞瘤细胞悬液收集到50ml离心管中，在冰上超声破碎细胞，超声器设置为：振幅35%，总时间20分钟，间隔时间5秒开3秒关；采用差速离心法，在4℃4000rpm离心5分钟，取上清，4℃20000g离心30分钟，沉淀收集为细胞内容物，上清10℃25000rpm离心2小时，收集上清加入细胞内容物中，沉淀为细胞膜；

S2：构建锆基金属有机框架NU-801：

将1,4-二溴苯，丙烯酸乙酯，K₂CO，Pd(OAc)₂和DMF在250mL圆底烧瓶中混合；将混合物在130°C搅拌24小时；然后，将其用乙酸乙酯和水萃取几次；合并有机相并用无水MgSO₄干燥，同时在减压下蒸馏有机溶剂；之后，将混合物进行柱色谱法，石油/乙酸乙酯4:1 v/v，获得白色粉末二乙基3,3'-（1,4-亚苯基）（2E，2'E）-二丙烯酸酯；将白色粉末悬浮在THF、H₂O和10m NaOH水溶液的混合物中；将混合物搅拌并加热至回流12小时，然后在减压下除去THF；最后，通过使用稀HCl将溶液的pH值调节至3；过滤收集固体，用水洗涤，干燥，得到白色粉末H₂PDA；

将有机接头H₂PDA和ZrOCl₂·8 H2O的混合物溶解在作为主要溶剂的DMF中，并加入甲酸作为调节剂超声15分钟，盖上有螺口盖的小瓶；将混合物70°C加热120小时；将产物用DMF和丙酮洗涤3次，并且在离心分离之后通过倾析溶剂来收集产物；

S3：NU-801包裹细胞内容物Intra@ NU-801的制备：

将NU-801浸入15ml含细胞内容物的水溶液中12小时；通过离心从溶液中分离出Intra@NU-801，随后用水洗涤，然后保存在水中；

S4：细胞膜包裹金属有机框架Intra@ NU-801@pD-Mem的制备：

将10mL含有制备的神经母细胞瘤细胞膜及10mg多巴胺盐酸盐的10mM Tris-HCL 缓冲溶液pH 8.5与Intra@ NU-801混合，在室温下剧烈搅拌1h，然后10000×g离心20分钟纯化，并用去离子水洗涤3次，以除去多余的细胞膜；Intra@ NU-801@pD-Mem表面显示鼠胚神经母细胞瘤的膜蛋白。

4.根据权利要求3所述纳米工程化神经母细胞瘤细胞的构建方法，其特征在于：所述神经母细胞瘤细胞为鼠胚神经母细胞细胞系Neuro-2a，购于中国典型培养物保藏中心，CCTCC编号GDC0162。