[发明专利]生物肝脏组织脂质含量的检测方法

说明书

本发明提供了一种生物肝脏组织脂质含量的检测方法。本发明通过向生物肝脏组织中加入第一混合溶剂，经匀浆、离心后，得到第一萃取液；再向第一萃取液中加入第二混合溶剂，并加入醋酸水溶液，经二次萃取得到第二萃取液；然后将负载有银离子的硅胶作为填料，利用含有该填料的固相萃取柱对第二萃取液进行固相萃取，得到脂质提取液，并采用色谱‑质谱联用技术对其进行检测，得到生物肝脏组织中各类脂质的含量。通过上述方式，本发明能够通过两步液相萃取充分提取生物肝脏组织中含有的各类脂质，并通过制备负载有银离子的硅胶对萃取液进行固相萃取，实现对脂质的有效富集，从而有效提高脂质含量检测的灵敏度和准确性，具有较好的应用前景。

技术领域

本发明涉及脂质含量检测技术领域，尤其涉及一种生物肝脏组织脂质含量的检测方法。

背景技术

脂质通常被定义为自然界中存在的一类难溶于水、易溶于有机溶剂的小分子化合物，是生物体内非常重要的物质。作为构成生物膜的主要成分，脂质具有分子多样性和多种生物功能，包括为蛋白质相互作用提供合适的环境、储存能量、作为重要的信使分子等。在生物体的各个器官中，肝脏在脂质的消化、吸收、合成、分解与运输过程中均具有重要作用，对生物肝脏组织中的脂质含量进行准确有效的检测对于肝脏酯类代谢组学的研究具有重要的意义。

目前，对肝脏组织中脂质含量的检测主要包括脂质的提取和检测两个步骤。其中，对脂质的提取是脂质检测过程的重要工序，其目的在于去除复杂生物样品中可能对脂质检测造成干扰的蛋白质、糖等物质，以保证检测结果的准确性。然而，现有技术中常用的脂质提取方法通常需要使用较多的组织样本，且提取过程使用的溶剂存在毒性、对组织内的脂质富集效果不足，不仅影响了提取过程的效率，也影响了检测结果的准确性。

公开号为CN109459518A的专利提供了一种生物体肝脏组织中脂质的提取和检测方法。该专利通过采用毒性小的甲基叔丁基醚和甲醇作为提取溶剂对生物体肝脏组织中的脂质进行提取，萃取的脂质数量多、涵盖种类多，达到了操作简便、快速提取的目的；并采用高分辨液质联用仪对提取的脂质进行检索分析，从而完成对生物体肝脏组织中脂质的提取和检测。然而，在采用该专利提供的方法提取脂质时，其上层有机相与下层水相间的界面存在不稳定性，容易造成脂质提取率不高和可重复性较差的问题，检测的灵敏度较低；并且，采用该方法提取到的脂质中会含有较多的极性基质，对后续脂质含量的检测过程产生干扰，对肝脏组织脂质含量的检测结果不够准确。

有鉴于此，有必要设计一种改进的生物肝脏组织脂质含量的检测方法，以解决上述问题。

发明内容

针对上述现有技术的缺陷，本发明的目的在于提供一种生物肝脏组织脂质含量的检测方法。通过对生物肝脏组织进行两步液相萃取，充分提取其中含有的各类脂质，提高生物肝脏组织中脂质的提取率，使检测结果具有较高的准确度；并通过对液相萃取后的萃取液进行固相萃取，实现对脂质的有效富集，提高脂质含量检测的灵敏度。

为实现上述目的，本发明提供了一种生物肝脏组织脂质含量的检测方法，包括如下步骤：

S1、向生物肝脏组织中加入含有异丙醇和乙腈的第一混合溶剂，进行匀浆处理，得到匀浆液；对所述匀浆液进行离心处理，取上层清液作为第一萃取液；

S2、向步骤S1得到的所述第一萃取液中加入含有正己烷和醋酸乙酯的第二混合溶剂，再加入醋酸水溶液，充分涡旋后进行二次萃取，取上层清液作为第二萃取液；

S3、将负载有银离子的硅胶作为填料，利用含有所述填料的固相萃取柱对步骤S2得到的所述第二萃取液进行固相萃取，得到脂质提取液；

S4、采用色谱-质谱联用技术对步骤S3得到的所述脂质提取液进行检测，得到生物肝脏组织中各类脂质的含量。

作为本发明的进一步改进，在步骤S3中，所述填料的制备方法包括如下步骤：