[发明专利]生物肝脏组织脂质含量的检测方法

权利要求书

1.一种生物肝脏组织脂质含量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、向生物肝脏组织中加入异丙醇和乙腈的第一混合溶剂，进行匀浆处理，得到匀浆液；对所述匀浆液进行离心处理，取上层清液作为第一萃取液；

S2、向步骤S1得到的所述第一萃取液中加入正己烷和醋酸乙酯的第二混合溶剂，再加入醋酸水溶液，充分涡旋后进行二次萃取，取上层清液作为第二萃取液；

S3、将负载有银离子的硅胶作为填料，利用含有所述填料的固相萃取柱对步骤S2得到的所述第二萃取液进行固相萃取，在所述固相萃取过程中以1-己烯作为洗脱液进行洗脱，得到脂质提取液；

S4、采用色谱-质谱联用技术对步骤S3得到的所述脂质提取液进行检测，得到生物肝脏组织中各类脂质的含量；

在步骤S3中，所述填料的制备方法包括如下步骤：

S31、将硅胶颗粒加入盐酸溶液中，在90～100℃下充分混合14～16h后，经过滤、洗涤、干燥后，得到活化的硅胶；

S32、将甲基咪唑和3-氯丙基三乙氧基硅烷加入乙腈溶液中，在100～110℃下反应16～20h后，再加入六氟磷酸钾，继续反应24～28h后，过滤并收集滤液；

S33、将步骤S32得到的所述滤液与甲苯混合后，再加入步骤S31得到的所述活化的硅胶，在100～110℃下反应22～26h，并将产物过滤、洗涤、干燥后得到功能化的硅胶；

S34、将步骤S33得到的所述功能化的硅胶加入四氟硼酸银的丙酮溶液中，在避光条件下充分混合8～10h后，经过滤、洗涤、干燥，得到负载银离子的硅胶。

2.根据权利要求1所述的生物肝脏组织脂质含量的检测方法，其特征在于：在步骤S33中，所述滤液与所述活化的硅胶的质量比为(2～3):1。

3.根据权利要求1或2所述的生物肝脏组织脂质含量的检测方法，其特征在于：在步骤S34中，所述四氟硼酸银的丙酮溶液中的银离子浓度为0.1～0.5mol/L。

4.根据权利要求1所述的生物肝脏组织脂质含量的检测方法，其特征在于：在步骤S3中，所述固相萃取过程包括如下步骤：将所述第二萃取液加入含有所述填料的固相萃取柱中，待平衡后再以正己烷为淋洗剂进行淋洗，然后以1-己烯作为洗脱剂进行洗脱，并收集洗脱液，氮吹浓缩后即得到脂质提取液。

5.根据权利要求1所述的生物肝脏组织脂质含量的检测方法，其特征在于：在步骤S1中，所述第一混合溶剂中异丙醇和乙腈的体积比为1:(2～3)。

6.根据权利要求1所述的生物肝脏组织脂质含量的检测方法，其特征在于：在步骤S1中，所述生物肝脏组织与所述第一混合溶剂的质量体积比为100mg:(4～6)mL。

7.根据权利要求1所述的生物肝脏组织脂质含量的检测方法，其特征在于：在步骤S2中，所述第二混合溶剂中正己烷和醋酸乙酯的体积比为(3～4):1。

8.根据权利要求1所述的生物肝脏组织脂质含量的检测方法，其特征在于：在步骤S2中，所述第二混合溶剂与所述醋酸水溶液的体积比为1:1；所述醋酸水溶液的浓度为1％～2％。

9.根据权利要求1所述的生物肝脏组织脂质含量的检测方法，其特征在于：在步骤S2中，所述第一萃取液与所述第二混合溶剂的体积比为1:(1～2)。