[发明专利]基于氧化石墨烯的茯苓多糖纳米佐剂及佐剂/抗原共递送疫苗的制备与应用

说明书

基于氧化石墨烯的茯苓多糖纳米佐剂及佐剂/抗原共递送疫苗的制备与应用，属于药物领域。该发明包括以纳米氧化石墨烯材料作为载体，与负载在该载体上的茯苓多糖形成的茯苓多糖纳米佐剂，及由该佐剂与抗原形成的佐剂/抗原共递送疫苗。茯苓多糖纳米佐剂能促进树突状细胞成熟，增强淋巴细胞功能，并利于药物缓释，有效地延长药效，防止免疫耐受，极大增强了免疫效果和反应时间。佐剂/抗原共递送疫苗增强了茯苓多糖和抗原的生物利用率，使抗原和佐剂可被同一细胞摄取，大大增强疫苗靶向性，该疫苗不仅可诱导体液免疫，同时还能诱导较强的细胞免疫。本发明作为一种新型佐剂及疫苗，可预期用于人类疾病的预防和治疗。

技术领域

本发明属于药物领域，具体涉及一种基于氧化石墨烯材料的茯苓多糖纳米佐剂及由该茯苓多糖纳米佐剂与抗原形成的佐剂/抗原共递送疫苗的制备方法与应用。

背景技术

疫苗的开发和应用已从预防疾病扩展到许多非传染性疾病的治疗，传统减毒活疫苗通常具有较高的免疫原性，但具有回复突变的危险，免疫效果也具有一定局限性。而灭活疫苗、亚单位疫苗、DNA疫苗、重组疫苗相对安全，但免疫原性有限，需要辅以佐剂才能发挥长期有效的保护效果。免疫佐剂作为一种非特异性免疫增强剂，通过预先或与抗原同时注入体内，可以显着增强免疫效果或改变接种疫苗后的免疫反应类型。自从铝佐剂在20世纪20年代开始被批准使用以来，已经成为了使用最多最广泛的佐剂，铝佐剂可以增强初次免疫，减少抗原用量以及免疫次数，但不能诱导CTL反应，且可能发生多种不良反应。经过几十年的缓慢进展，20世纪90年代末期水包油乳剂MF59被批准上市，21世纪以来已经先后批准了AS03、AS01、AS04、CpG ODN佐剂。除了上述这些少数疫苗佐剂被批准可供人类使用，大部分佐剂还处于临床或临床前试验阶段，可供人类使用的佐剂十分有限，所以急需开发出新型佐剂。

茯苓[Poria cocos(Schw.)Wolf]是一种历史悠久的中药，广泛应用于中药的治疗中。茯苓属多孔菌科卧孔菌属真菌的干燥菌核，主要生长在松树的根上。其有效成分主要有：多糖、生物碱、皂苷、萜类、多酚类等物质。多糖是茯苓的主要成分，茯苓多糖是从茯苓中提取和纯化的不同类型多糖的混合物，其含量约占茯苓干菌核的84％，其中包括水溶性多糖和碱溶性多糖，由葡萄糖，岩藻糖，阿拉伯糖，木糖，甘露糖和半乳糖组成。大量研究表明，茯苓多糖具有免疫增强作用，保护机体免疫器官，增强T细胞、B细胞功能，影响树突状细胞的活性，并对某些细胞因子的释放产生影响，从而促进了特异性和非特异性免疫应答。且茯苓多糖的低毒性和较少的副作用更使其成为理想的免疫佐剂。但茯苓多糖分子量较大，药物释放太快，会导致注射药量过大，从而加大了茯苓多糖在临床应用的难度。因此，急需解决这一问题。

纳米材料是指晶粒尺寸小于100nm的单晶体或多晶体。纳米颗粒具有容易被多种细胞摄取的生物学特征，能被抗原提呈细胞吞噬，从而增强抗原引起的免疫反应。纳米材料还可以缓慢释放抗原，减少抗原用量或次数，增加小分子抗原的尺寸，充分加工处理抗原，使免疫效应更加持久。某些纳米颗粒本身对免疫系统具有刺激作用，使用含有纳米材料的疫苗进行免疫接种，会导致粘膜层和胃肠道粘膜发生免疫反应。石墨烯是一种具有二维平面结构的碳纳米材料，它的特殊单原子层结构使其具有许多独特的物理化学性质。氧化石墨烯是石墨烯的氧化物，因经氧化后，其上含有更多的含氧官能团，可经由各种与含氧官能团的反应而改善本身性质。氧化石墨烯及其衍生物因具有很高的比表面积，导电导热性强，生物相容性好等优点，在药物载体、癌症的检疗等生物医学领域具有广泛的应用。因此，有必要选择茯苓多糖作为原料，通过氧化石墨烯包载的手段，缓慢释放药物，减少茯苓多糖用量，找到一种有效,安全,稳定的免疫增强剂——基于氧化石墨烯材料的茯苓多糖纳米佐剂。

发明内容

本发明提供一种茯苓多糖纳米佐剂及由该佐剂形成的佐剂/抗原共递送疫苗。该茯苓多糖纳米佐剂可以极大增强疫苗免疫效果，减少茯苓多糖的用量，包载抗原后可以减少疫苗抗原的使用量，可解决现有技术存在的临床应用中的各种限制问题。