[发明专利]基于氧化石墨烯的茯苓多糖纳米佐剂及佐剂/抗原共递送疫苗的制备与应用

权利要求书

1.一种基于氧化石墨烯材料的茯苓多糖纳米佐剂，其特征在于，所述的茯苓多糖纳米佐剂的载体材料为纳米氧化石墨烯，在纳米氧化石墨烯载体上连接茯苓多糖，形成基于氧化石墨烯材料的茯苓多糖纳米佐剂。

2.根据权利要求1所述的一种基于氧化石墨烯材料的茯苓多糖纳米佐剂，其特征在于，所述的氧化石墨烯材料为纳米化处理的纳米级氧化石墨烯，该纳米氧化石墨烯粒径在1～100nm之间，分子量为5kDa～10kDa；所述的茯苓多糖的分子量为8kDa～15kDa，其组成单糖包括葡萄糖、甘露糖、岩藻糖、半乳糖等，其质量比依次为(2～3.5):(1～2):(0.3～4):1。

3.根据权利要求1所述的一种基于氧化石墨烯材料的茯苓多糖纳米佐剂，其特征在于，所述纳米氧化石墨烯与茯苓多糖的质量比为1:2.5～1:10。

4.根据权利要求1所述的一种基于氧化石墨烯材料的茯苓多糖纳米佐剂，其特征在于，所述的茯苓多糖纳米佐剂的粒径为50nm～500nm，分子量为15kDa～45kDa。

5.制备权利要求1所述的一种基于氧化石墨烯材料的茯苓多糖纳米佐剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)用无菌水溶解氧化石墨烯，超声2小时后冰浴超声30分钟，加入强碱，继续超声2小时；16,000g高速离心，收集上清液，即获得纳米化的氧化石墨烯载体溶液，该纳米氧化石墨烯载体溶液终浓度为0.1～10mg/mL；

(2)将上述(1)中的纳米氧化石墨烯溶液超声1小时，调节PH至9-10,加入环氧氯丙烷，通入氮气反应，在水浴40℃搅拌反应4小时后透析去除未反应环氧氯丙烷；

(3)将茯苓多糖溶液溶于上述(2)中的纳米氧化石墨烯溶液中，调节PH至9～10，42℃水浴3小时，离心收集即得包载纳米氧化石墨烯的茯苓多糖纳米佐剂。

6.一种佐剂/抗原共递送疫苗，所述的佐剂/抗原共递送疫苗包含有如权利要求1所述茯苓多糖纳米佐剂，并负载病毒抗原。

7.如权利要求6所述的佐剂/抗原共递送疫苗，所述病毒抗原包括：灭活病毒或重组蛋白。

8.根据权利要求6所述的佐剂/抗原共递送疫苗，其特征在于，所述的佐剂/抗原共递送疫苗的抗原与茯苓多糖均与氧化石墨烯相连。

9.制备如权利要求6所述的佐剂/抗原共递送疫苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将包载纳米氧化石墨烯的茯苓多糖纳米佐剂溶液调PH至4.5～7.2，加入连接EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)和Sulfo-NHS(N-羟基硫代琥珀酰亚胺)，混合15min～1h，调PH至6～8，加入病毒抗原溶液，混合1～5小时，脱盐柱脱盐处理即得佐剂/抗原共递送疫苗；

EDC/Sulfo-NHS的摩尔比为1：2～10：1，病毒抗原溶液浓度为0.1～20mg/mL；EDC/氧化石墨烯浓度比为1：5～1：20，优选为1：10。

10.权利要求1～9中任一项中所述的一种茯苓多糖纳米佐剂或由该佐剂形成的佐剂/抗原共递送疫苗的用途，其特征在于，用于预防性及治疗性疫苗领域的应用。