[发明专利]一种亚细胞定位表达载体及构建方法在审
| 申请号： | 202011135875.4 | 申请日： | 2020-10-22 |
| 公开（公告）号： | CN112266925A | 公开（公告）日： | 2021-01-26 |
| 发明（设计）人： | 丁照华;程文;王志武;唐媛;崔海燕;赵苏娴;卢增斌 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院玉米研究所（山东省农业科学院玉米工程技术研究中心） |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66;C12N15/65 |
| 代理公司： | 济南尚本知识产权代理事务所(普通合伙) 37307 | 代理人： | 杨宝根 |
| 地址： | 250100*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 细胞 定位 表达 载体 构建 方法 | ||
1.一种亚细胞定位表达载体的构建方法，其特征在于，所述亚细胞定位表达载体的构建方法包括以下步骤：
（1）TA载体中获得ccdB毒性蛋白，同时利用PCR在Gateway载体p2FGW7中扩增得到eGFP片段，在pCambia载体中获得多克隆位点以及载体的骨架，获得P35s∷ccdB-eGFP片段；
（2）用多克隆位点进行酶切后，所获得的线性片段中不再含有ccdB蛋白，同时获得黏性末端，利用连接酶将含有相应黏性末端的目的片段插入到载体中；
（3）利用任意一种限制性内切酶消化后，然后利用连接酶将片段进行连接，获得P35s∷eGFP载体，该载体产生的蛋白质进入细胞的任意结构，用于阳性对照。
2.如权利要求1所述的亚细胞定位表达载体的构建方法，其特征在于，所述ccdB包含306bp的碱基，eGFP为增强型绿色荧光蛋白，ccdB的限制性内切酶位点为7个，分别为
3.如权利要求1所述的亚细胞定位表达载体的构建方法，其特征在于，所述P35s∷eGFP载体中，目的片段与eGFP基因之间插入15个碱基的linker。
4.一种利用权利要求1所述亚细胞定位表达载体的构建方法构建的亚细胞定位表达载体，其特征在于，所述亚细胞定位表达载体序列为SEQ ID NO.1。
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