[发明专利]一种T-2毒素的检测方法

说明书

本发明公开了一种T‑2毒素的可视化检测方法，通过单链DNA适配体、样品、MOPS缓冲液振荡混匀孵育反应后，加入AuNPs孵育反应，再加入NaCl溶液孵育反应，测定待测反应液的A620/A520值，并将该值代入由T‑2标准溶液构建的线性方程中以计算得到样品中毒素浓度。本发明方法对T‑2毒素的最低检出限为0.124nM(57.8pg/mL)，本发明方法在操作过程和结果等方面均显示出明显的优势，此外，本发明方法对T‑2毒素的检测具有高选择性，在相同条件下，本发明方法并不受包括黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮和伏马菌素B1在内的其他真菌毒素的影响。

技术领域

本发明属于微量毒素检测技术领域，尤其涉及一种T-2毒素的检测方法。

背景技术

T-2毒素是一种具有极强毒性的真菌次级代谢产物，广泛分布于小麦、玉米、谷物和大米及其制品中。T-2毒素在体内外能够抑制DNA、RNA、蛋白质合成以及线粒体功能，具有致畸、致癌、致突变效应。根据欧洲食品安全委员会建议，人们对T-2每日允许的摄入量和急性参考剂量分别为0.02μg/kg和0.3μg/kg，这就要求有高灵敏和准确的T-2检测方法，以便正确评估人们所面临的风险。

目前能有效检测T-2的方法包括高效液相色谱、液相色谱-质谱、超高效液相色谱-串联质谱以及基于免疫分析等检测方法，但是这些方法都需要依赖昂贵的仪器，并且实际检测过程也是程序复杂、费时费力，对操作人员的专业性要求很高，并不能满足T-2的实时、快速检测的要求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种T-2毒素的检测方法，旨在解决上述背景技术中现有技术的不足之处。

本发明是这样实现的，本发明公开了一种T-2毒素的可视化检测方法，该方法包括以下步骤：

(1)将不同已知浓度的T-2标准溶液作为样品分别执行以下操作以获得各对应的标准反应液：将40～60μL、1μM的单链DNA适配体与40～60μL样品加入到130～180μL、10mM、pH 7.0的MOPS缓冲液中，振荡混匀、室温下孵育反应1～3h，再加入200μL、10nM的AuNPs孵育20～40min，再加入40～50μL、1M NaCl溶液孵育5～20min后，得到标准反应液；

(2)将各标准反应液转移至96孔板，测得各浓度T-2标准溶液对应的A620/A520标准值，根据各A620/A520标准值绘制的吸光度线性变化的曲线，在设定浓度范围内T-2标准溶液浓度与A620/A520值呈线性关系，得出线性方程；

(3)将待测T-2溶液作为样品执行与步骤(1)相同的所述操作并得到待测反应液，具体为：将40～60μL、1μM的单链DNA适配体与40～60μL待测T-2溶液加入到130～180μL、10mM、pH 7.0的MOPS缓冲液中，振荡混匀、室温下孵育反应1～3h，再加入200μL、10nM的AuNPs孵育20～40min，再加入40～50μL、1M NaCl溶液孵育5～20min后，得到待测反应液；

将所述待测反应液转移至96孔板，测得待测反应液的A620/A520值，将该A620/A520值代入步骤(2)所述线性方程中，计算得到待测T-2溶液中T-2毒素浓度。

优选地，在步骤(1)中，将50μL、1μM的单链DNA适配体与50μL样品加入到157μL、10mM、pH 7.0的MOPS缓冲液中，振荡混匀、室温下孵育反应1～3h，再加入200μL、10nM的AuNPs孵育30min，再加入43μL、1M NaCl溶液孵育10min后，得到标准反应液。

优选地，在步骤(1)中，所述单链DNA适配体为5’-GTATATCAAGCATCGCGTGTTTACACATGCGAGAGGTGAA-3’。