[发明专利]一种T-2毒素的检测方法在审
| 申请号： | 202011124224.5 | 申请日： | 2020-10-20 |
| 公开（公告）号： | CN112326950A | 公开（公告）日： | 2021-02-05 |
| 发明（设计）人： | 张紊玮;王艳玲;毕阳 | 申请（专利权）人： | 甘肃农业大学 |
| 主分类号： | G01N33/53 | 分类号： | G01N33/53;G01N21/31 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 730070 *** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 毒素 检测 方法 | ||
1.一种T-2毒素的可视化检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)将不同已知浓度的T-2标准溶液作为样品分别执行以下操作以获得各对应的标准反应液：将40～60μL、1μM的单链DNA适配体与40～60μL样品加入到130～180μL、10mM、pH7.0的MOPS缓冲液中，振荡混匀、室温下孵育反应1～3h，再加入200μL、10nM的AuNPs孵育20～40min，再加入40～50μL、1M的NaCl溶液孵育5～20min后，得到标准反应液；
(2)将各标准反应液转移至96孔板，测得各浓度T-2标准溶液对应的A620/A520标准值，根据各A620/A520标准值绘制的吸光度线性变化的曲线，在设定浓度范围内T-2标准溶液浓度与A620/A520值呈线性关系，得出线性方程；
(3)将待测T-2溶液作为样品执行与步骤(1)相同的所述操作并得到待测反应液，将所述待测反应液转移至96孔板，测得待测反应液的A620/A520值，将该A620/A520值代入步骤(2)所述线性方程中，计算得到待测T-2溶液中T-2毒素浓度。
2.如权利要求1所述的T-2毒素的可视化检测方法，其特征在于，在步骤(1)中，将50μL、1μM的单链DNA适配体与50μL样品加入到157μL、10mM、pH 7.0的MOPS缓冲液中，振荡混匀、室温下孵育反应1～3h，再加入200μL、10nM的AuNPs孵育30min，再加入43μL、1M的NaCl溶液孵育10min后，得到标准反应液。
3.如权利要求1所述的T-2毒素的可视化检测方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述单链DNA适配体为5’-GTATATCAAGCATCGCGTGTTTACACATGCGAGAGGTGAA-3’。
4.如权利要求1所述的T-2毒素的可视化检测方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述单链DNA适配体为活化后的适配体，该活化过程为：先将适配体溶于水中，用MOPS缓冲液稀释至1μM，95℃加热5min，迅速于冰水中冷却15min后，在室温25℃放置20min。
5.如权利要求1所述的T-2毒素的可视化检测方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述设定浓度为0.21435～10717.5nM，所述直线方程为y＝2.6×10-5+0.7666，相关系数为0.99654。
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