[发明专利]一种快速筛选高产聚谷氨酸菌株的方法

说明书

本发明公开了一种快速筛选高产聚谷氨酸菌株的方法。本发明通过配制半固体发酵培养基，灭菌后将培养基分装入无菌的培养孔板中，待半固体发酵培养基凝结后将单菌落用牙签挑进装有半固体发酵培养基的孔中，盖好孔板盖，将孔板倒置培养，培养24‑96h后，观察孔板盖是否有液体状产物；如有，则接入该孔的菌株为聚谷氨酸高产菌株。本方法简化了传统筛选高产γ‑聚谷氨酸菌株的过程，大大减轻了筛选过程的工作量。

技术领域

本发明属于微生物发酵领域，具体涉及一种快速筛选高产聚谷氨酸菌株的方法。

背景技术

γ-聚谷氨酸(γ-PGA)主要由芽孢杆菌属(Bacillus)分泌出的胞外多肽，是这些微生物的荚膜的主要成分，其由谷氨酸单体通过γ-谷氨酰胺键聚合而成。γ-PGA是无毒无害且对环境无污染的绿色生物产品，其具有高水溶性、吸水能力强、可降解、很好的生物相容性、成膜性强、粘度高和成纤维性等独特的物理化学性能和生物学特性，使其可在医药、食品、环境、日化、农业等行业都具有广阔的应用前景。

目前，依然不少研究者筛选高产的γ-PGA的菌株，来降低γ-PGA的生产成本。但是，目前依然采用的是将样品稀释涂布在分离培养基中，然后将在分离培养基上单菌落接入液体发酵培养基中，进行摇瓶发酵；发酵完，测发酵液中γ-PGA的产量；该方法工作量大，摇瓶发酵需要大量的空间进行，不能同时对大量的分离培养基上的单菌进行筛选。因此需要开发能批量筛选高产γ-PGA的菌株的方法。

发明内容

本发明针对现有技术方法不能同时对大量的高产γ-PGA的菌株进行筛选的不足，提供一种快速筛选高产聚谷氨酸菌株的方法，通过半固体发酵培养基在孔板中进行批量筛选，该方法简单易行，成本低廉。

本发明的快速筛选高产聚谷氨酸菌株的方法，包括以下步骤：

a.将待筛选样品梯度稀释后涂布于分离培养基上培养；

b.根据待筛选样品中菌种/菌群类型，配制相应的半固体发酵培养基，灭菌后将融化的培养基分装入无菌的培养孔板中，将分离培养基上单菌落转接到孔中的凝结后的半固体发酵培养基上，盖好孔板盖，将孔板倒置放入相对湿度维持80％以上的培养箱中培养；观察孔板盖是否有液体状产物，如有，则接入该孔的菌株为高产聚谷氨酸菌株。

优选，所述的半固体发酵培养基中含有琼脂的量为质量分数0.2％-0.8％；所述的培养基分装，其分装量控制为培养基液面离盖好后的孔板盖的距离为2-15mm。

优选，所述的培养孔板为96孔、48孔、24孔或12孔培养板。

优选，所述的分离培养基为营养琼脂培养基。

优选，待筛选样品中菌种/菌群为地衣芽孢杆菌，其半固体发酵培养基为：含有柠檬酸12g/L、甘油80g/L、L-谷氨酸20g/L、氯化铵7g/L、磷酸氢二钾0.5g/L、七水硫酸镁0.5g/L、二水氯化钙0.15g/L、一水硫酸锰0.104g/L、六水氯化铁0.01g/L和琼脂2g/L，余量为水，pH6.5。

优选，待筛选样品为纳豆，其半固体发酵培养基为：含有大豆粉40g/L和琼脂8g/L，余量为水，pH6.5。

优选，待筛选样品中菌种/菌群为枯草芽孢菌，其半固体发酵培养基为：含有葡萄糖60g/L、蛋白胨20g/L、磷酸氢二钾1.5g/L、七水硫酸镁0.05g/L、二水氯化钙0.1g/L、一水硫酸锰0.104g/L、六水氯化铁0.01g/L和琼脂5g/L，余量为水，pH6.5。

优选，待筛选样品为盐碱地土样，其半固体发酵培养基为：含有葡萄糖100g/L、蛋白胨50g/L、谷氨酸钠100g/L、磷酸氢二钾2g/L、七水硫酸镁0.05g/L和琼脂3g/L，余量为水，pH6.5。

优选，所述的步骤a的涂布于分离培养基上培养，是在37℃培养24h。