[发明专利]一种儿茶酚胺的LC-MS/MS检测方法及预处理试剂盒

说明书

本发明涉及儿茶酚胺检测技术领域，具体地说，涉及一种儿茶酚胺的LC‑MS/MS检测方法主要包括取检测样品置于离心管中，加入内标溶液和稀释液稀释；稀释后溶液加入WCX固相萃取小柱中萃取，萃取后使用淋洗液淋洗；淋洗后真空抽干WCX固相萃取小柱，抽出溶液使用甲酸甲酯溶液进行洗脱，并收集洗脱液，洗脱液用稀有气体吹干后进行复溶；取复溶后溶液通过超细滤膜过滤后置于色谱柱中进行色谱分析。还包括一种儿茶酚胺的LC‑MS/MS检测预处理试剂盒，所述预处理试剂盒包含WCX固相处理萃取小柱、稀释液以及洗脱液。该发明有效的提高了现有技术对儿茶酚胺的检测精度优化了，检测流程提升了检测效率。

技术领域

本发明涉及儿茶酚胺检测技术领域，具体地说，涉及一种儿茶酚胺的LC-MS/MS检测 方法及预处理试剂盒。

背景技术

儿茶酚胺是一种含有儿茶酚和胺基的神经类物质。儿茶酚和胺基通过L-酪氨酸在交感 神经、肾上腺髓质和嗜铬细胞位置的酶化步骤结合。通常，儿茶酚胺是指去甲肾上腺素 (NA)、肾上腺素(Adr)和多巴胺(DA)。这三种儿茶酚胺都是由酪氨酸为前体转化得到的。即含有邻苯二酚(即儿茶酚)的胺类化合物，包括多巴胺、去甲肾上腺素和肾上腺素及它们的衍生物。去甲肾上腺素和肾上腺素既是肾上腺髓质所分泌的激素，又是交感神经和中枢神经系统中去甲肾上腺素能纤维的神经介质。去甲肾上腺素在中枢神经系统内分布广泛，含量较多，而肾上腺素含量则较少。多巴胺主要集中在锥体外系部位，也是一种神经 介质。它们是重要的典型的肾上腺素受体激动剂。儿茶酚胺类物质在体内调节基本生理功能，传递生理信号，是正常生理过程中重要的信号介质，同时在病理过程中也出现其含量的相应变化。临床上可以用于辅助诊断高血压、甲亢、嗜铬细胞瘤和神经母细胞瘤等内分泌相关疾病。儿茶酚胺物质的化学结构特点是：带有一个双羟基苯核和一个带氨基的侧链，在生物样品中儿茶酚胺类物质含量极低。

如今儿茶酚胺检测技术多采用传统的质谱分析方法进行检测，质谱法(MassSpectrometry，MS)即用电场和磁场将运动的离子(带电荷的原子、分子或分子碎片，有分子离子、同位素离子、碎片离子、重排离子、多电荷离子、亚稳离子、负离子和离子-分 子相互作用产生的离子)按它们的质荷比分离后进行检测的方法。测出离子准确质量即可 确定离子的化合物组成。这是由于核素的准确质量是一多位小数，决不会有两个核素的质 量是一样的，而且决不会有一种核素的质量恰好是另一核素质量的整数倍。分析这些离子 可获得化合物的分子量、化学结构、裂解规律和由单分子分解形成的某些离子间存在的某 种相互关系等信息。

现有的儿茶酚胺的检测方法由于缺少对检测样品的预处理或处理效果不佳易导致基 质效应导致测量结果误差较大，检测精度不足等问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种儿茶酚胺的LC-MS/MS检测方法及预处理试剂盒，以解决 上述背景技术中提出的问题。

一种儿茶酚胺的LC-MS/MS检测方法包含以下步骤：

步骤一：取检测样品置于离心管中，加入内标溶液和稀释液稀释；

步骤二：稀释后溶液加入WCX固相萃取小柱中萃取，萃取后使用淋洗液淋洗；

步骤三：淋洗后真空抽干WCX固相萃取小柱，抽出溶液使用甲酸甲酯溶液进行洗脱， 并收集洗脱液，洗脱液用稀有气体吹干后进行复溶；

步骤四：取复溶后溶液通过超细滤膜过滤后置于色谱柱中进行色谱分析。

优选的，所述步骤一中内标溶液具体为异丙肾上腺素内标溶液，所述稀释溶液具体为 抗坏血酸和乙酸铵混合溶液。

优选的，所述稀释液中抗坏血酸质量分数为0.1-0.5％，乙酸铵的浓度为30-60mmol· L^-1，且所述稀释液、内标溶液和检测样本混合比4∶1∶1。