[发明专利]一种用于乙肝病毒基因检测的捕获探针组在审

专利信息
申请号: 202011115542.5 申请日: 2020-10-19
公开(公告)号: CN112322783A 公开(公告)日: 2021-02-05
发明(设计)人: 史健翔;张建营;王晓;王鹏;叶华;汤文学;郭建成;冯帅升;李记天;代丽萍;崔驰 申请(专利权)人: 郑州大学
主分类号: C12Q1/70 分类号: C12Q1/70;C12Q1/6869;C12N15/11
代理公司: 北京盛凡智荣知识产权代理有限公司 11616 代理人: 李青
地址: 450000 河南省郑*** 国省代码: 河南;41
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摘要:
搜索关键词: 一种 用于 乙肝病毒 基因 检测 捕获 探针
【说明书】:

本发明公开一种用于乙肝病毒基因检测的捕获探针组,所述探针组包含能特异性捕获A、B、C、D四种基因型的乙肝病毒基因的探针,所述探针为根据A、B、C、D四种基因型的乙肝病毒的全基因组序列设计的DNA序列。本发明提供的用于乙肝病毒基因检测的探针组具有操作简便、成本低廉、特异性好、灵敏度高等优点,其可以同时检测突变、缺失等各种类型突变,本发明的探针组及捕获测序方法可以节约测序成本,同时为乙肝患者的治疗方案的确定、合理干预、治疗措施等快速提供依据,符合精准医疗的发展趋势。

技术领域

本发明属于基因检测及分子遗传学领域,具体涉及一种用于乙肝病毒基因检测的捕获探针组。

背景技术

乙型肝炎病毒是引起乙型肝炎(简称乙肝)的病原体,属嗜肝DNA病毒科,该科病毒包含正嗜肝DNA病毒属和禽嗜肝DNA病毒属两个属,引起人体感染的是正嗜肝DNA病毒属。乙肝病毒的基因组(HBV-DNA)是由两条螺旋的DNA链围成的一个环形结构。其中一条较长负链已经形成完整的环状;另一条长度较短的正链,呈半环状。在感染肝细胞之后,这条半环状的DNA链就会以负链为模板,在催化剂-HBV-DNA聚合酶的作用下延长,最终形成完整的环状。这时的乙肝病毒基因组就形成了一个完全环状的双股DNA。把这种DNA称作共价闭合环状DNA(即cccDNA),可以把它看作是病毒复制的原始模板。模板形成后,病毒基因会以其中的一条cccDNA为模板,利用肝细胞基因中的酶和DNA聚合酶的“催化”,一段基因又一段基因地复制,形成负链和正链。最后再装配到一起形成新的HBV-DNA颗粒。乙肝传染病已被国家疾病预防控制中心列为重点监控的疾病之一,而乙肝病毒序列的研究一直都是近20年来分子生物学研究的重点领域,如何快速且准确的获得个体感染的乙肝病毒的基因序列,对序列进行分析有着重大意义。

乙型肝炎病毒基因结构复杂,易于变异,根据HBV-DNA核苷酸序列异质性≥8%为一种基因型的规定,HBV目前分为A~H八个基因型,其中A、B、C、F四个基因型存在不同的亚型,且分布呈区域性,A型主要分布在北欧、北美和中非;B、C型主要在亚洲;D型主要分布在地中海地区、中东及印度;其他型在南美及非洲大陆。我国感染HBV的人群中,约60%为B基因型,30%为C基因型,另有少数为D基因型和B、C基因型混合感染。有研究显示,HBV变异给疾病的预防、诊断、治疗和预后带来了新问题,不同基因型的基因变异、临床表现及对抗病毒、肝移植等的治疗反应存在差异。鉴于此,本专利重点针对乙肝病毒A、B、C、D四种基因型设计捕获探针。

目前,较为理想的遗传学检测乙肝病毒基因突变是发现导致乙肝病毒结构和功能缺陷的相关基因突变。乙肝病毒由于其在复制过程中HBV-DNA聚合酶缺乏校正功能,导致易于变异。HBV受自然压力、个体免疫力和药物治疗作用出现变异。HBV有四个开放阅读框架(ORE)即S、C、P、X区。这四个区域都易发生突变,不同区域的突变对于乙肝病毒的复制能力有不同程度的影响。直接测序是目前为止突变分析的金标准,但其阳性率很低,大多数难以获得准确的检测结果,因此,此方法存在很大的局限性。无法完全满足目前临床研究需要。而传统的一代基因测序法,虽然可以实现对乙肝病毒DNA全基因序列分析从而进行乙肝病毒基因突变的检测及分析,但其测序成本高,且检测灵敏度有限,也无法同时处理大量样本,所以无法大规模的应用在临床的诊断上去。

因此,基于以上背景,本发明提供一种用于乙肝病毒基因检测的捕获探针组,其能够一次性分析出乙肝病毒DNA的缺失、突变等变异信息,并能够一次性处理多个样本,具有耗时短成本低、特异性强的突出优点,在临床检测中具有重大意义。

发明内容

本发明的目的在于发明一种用于乙肝病毒基因检测的捕获探针组,该探针组包含能特异性捕获A、B、C、D四种基因型的乙肝病毒基因的探针,其可以更为全面、快速、准确的检测乙肝病毒基因的多种突变类型。

为实现上述目的,本发明的一种用于乙肝病毒基因检测的捕获探针组的具体技术方案为:

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