[发明专利]猪肺炎支原体基因工程亚单位疫苗、其制备方法及应用

权利要求书

1.蛋白组合物，包含：

序列如SEQ ID NO:2所示的第一融合蛋白，以及

序列如SEQ ID NO:6所示的第二融合蛋白。

2.基因组合物，包含分别用于编码权利要求1所述蛋白组合物中第一融合蛋白、第二融合蛋白的基因。

3.如权利要求2所述的基因组合物，其特征在于包含：

序列如SEQ ID NO:1所示的第一核酸分子，以及

序列如SEQ ID NO:5所示的第二核酸分子。

4.重组载体组合物，包括：

包含权利要求1所述蛋白组合物中第一融合蛋白的编码基因的第一重组载体，以及

包含所述蛋白组合物中第二融合蛋白的编码基因的第二重组载体。

5.如权利要求4所述的重组载体组合物，其特征在于：所述第一重组载体、第二重组载体包括pFastBac 1、pVL1393或pFastBac dual。

6.宿主细胞组合物，包括：

包含权利要求1所述蛋白组合物中第一融合蛋白的编码基因的第一宿主细胞，以及

包含所述蛋白组合物中第二融合蛋白的编码基因的第二宿主细胞。

7.如权利要求6所述的宿主细胞组合物，其特征在于：所述第一宿主细胞、第二宿主细胞选自昆虫细胞，所述昆虫细胞包括Sf9、High Five或 Sf21细胞。

8.一种免疫组合物，其特征在于包括：权利要求1所述的蛋白组合物；以及，医药学上可接受的载体。

9.如权利要求8所述的免疫组合物，其特征在于：所述医药学上可接受的载体包括MONTANIDE ISA 206 VG、MONTANIDE ISA 201 VG、液体石蜡、樟脑油、植物细胞凝集素之中的任意一种或者两种以上的组合。

10.一种蛋白组合物的制备方法，其特征在于包括：

提供权利要求1所述蛋白组合物中第一融合蛋白、第二融合蛋白的编码基因；

分别将所述第一融合蛋白的编码基因、第二融合蛋白的编码基因克隆到穿梭载体中，分别获得含有相应目的基因的第一重组穿梭载体、第二重组穿梭载体；

分别将所述第一重组穿梭载体、第二重组穿梭载体转化感受态细胞，并分离获得分别含有相应目的基因表达框的第一重组杆状病毒基因组质粒、第二重组杆状病毒基因组质粒；

分别以所述第一重组杆状病毒基因组质粒、第二重组杆状病毒基因组质粒转染昆虫细胞，并分别获得相应的第一重组杆状病毒、第二重组杆状病毒；

分别将所述第一重组杆状病毒、第二重组杆状病毒接种昆虫细胞并进行培养，之后分离获得所述第一融合蛋白、第二融合蛋白。

11.如权利要求10所述的制备方法，其特征在于：所述穿梭载体包括pFastBac 1、pVL1393或pFastBac dual；和/或，所述昆虫细胞包括Sf9、High Five或 Sf21细胞。

12.一种猪肺炎支原体基因工程亚单位疫苗的制备方法，其特征在于包括：采用权利要求10-11中任一项所述的方法制备第一融合蛋白、第二融合蛋白，并将所述第一融合蛋白、第二融合蛋白与医药学上可接受的载体混合。

13.如权利要求1所述蛋白组合物或权利要求8或9所述免疫组合物在生产用于在受试动物中诱导针对猪肺炎支原体抗原的免疫反应的药剂，或者，在生产用于预防动物受猪肺炎支原体感染的药剂中的用途。

14.如权利要求1所述蛋白组合物或权利要求8或9所述免疫组合物在制备猪肺炎支原体基因工程亚单位疫苗中的用途。