[发明专利]一种用于治疗口腔溃疡的骨髓间充质干细胞组合物及其制备方法

说明书

本发明公开了一种用于治疗口腔溃疡的骨髓间充质干细胞组合物，包括以下重量份的原料：骨髓间充质干细胞培养产物3‑5份，葡萄柚提取物1.5‑2.5份、凝胶基质10‑15份、纯化水50‑60份；骨髓间充质干细胞培养产物的制备过程如下：(1)分离人骨髓间充质干细胞；(2)将细胞接种于基础培养基中进行原代培养；(3)取步骤(2)融合度达到85％‑90％的细胞经胰酶消化后收集细胞，经清洗、匀浆、离心、透析、冻干，即得骨髓间充质干细胞培养产物。本发明提供的组合物，其中骨髓间充质干细胞培养产物为骨髓间充质干细胞经原代培养得到的培养产物，和葡萄柚提取物、凝胶基质配合使用，显著提高骨髓间充质干细胞对口腔溃疡的治疗效果，产品还具有舒缓作用，同时延长作用时间。

技术领域

本发明涉及干细胞领域，尤其涉及一种用于治疗口腔溃疡的骨髓间充质干细胞组合物及其制备方法。

背景技术

口腔溃疡，又称为“口疮”，是发生在口腔粘膜上的表浅性溃疡，一般溃疡的直径在0.5厘米以内、成圆形或卵圆形，溃疡面凹陷、周围充血。溃疡具有周期性、复发性及自限性等特点，好发于唇、颊、舌缘等。常常数个溃疡一同出现，疼痛感强烈，轻则一周痊愈，重者会反复发作，难以治愈。口腔溃疡的病因及致病机制仍不明确。诱因可能是局部创伤、精神紧张、食物、药物、激素水平改变及维生素或微量元素缺乏等。系统性疾病、遗传、免疫及微生物在其发生、发展中可能起重要作用。治疗主要以局部治疗为主，严重者需全身治疗。目前，治疗口腔溃疡的方法有直接喷涂消炎杀菌粉末于患处，严重者口服消炎药进行消炎，喷涂时剧痛无比，好多人难以接受，吃消炎药药效慢，并且伤肠胃，都不是最佳的选择。

徐娜、陈书尚等于2015年发表的“含漱人骨髓间充质干细胞上清液对肾移植术后口腔溃疡的疗效”中报道了骨髓间充质干细胞上清液对肾移植后口腔溃疡的疗效。但上述文献存在以下缺陷：一方面治疗时间持续长，治疗7天后显效率仅为72％，不能有效缩短患者的痛苦时间；另一方面，该文献仅公开了对肾移植后口腔溃疡的疗效，不清楚对其他原因引起的口腔溃疡是否具有治疗作用。因此骨髓间充质干细胞对口腔溃疡的治疗效果有待提高。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种用于治疗口腔溃疡的骨髓间充质干细胞组合物，缩短口腔溃疡的愈合时间，并且对溃疡处刺激较小，延长作用时间，减轻患者用药的痛苦，有助于溃疡面的痊愈。

本发明的目的之二在于提供一种用于治疗口腔溃疡的骨髓间充质干细胞组合物的制备方法。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现：

一种用于治疗口腔溃疡的骨髓间充质干细胞组合物，其特征在于，包括以下重量份的原料：骨髓间充质干细胞培养产物3-5份，葡萄柚提取物1.5-2.5份、凝胶基质10-15份、纯化水50-60份；

所述骨髓间充质干细胞培养产物的制备过程如下：

(1)分离人骨髓间充质干细胞：向骨髓中加入肝素抗凝，用PBS稀释后加入淋巴细胞分离液，离心后取中间白膜层，用PBS洗涤后进行细胞计数；

(2)将步骤(1)分离得到的细胞接种于基础培养基中进行原代培养，每2-3天更换培养基，至细胞融合度达到85％-90％，所述基础培养基为低糖DMEM培养基，所述低糖DMEM培养基中包含添加剂、体积分数5％的胎牛血清，所述添加剂的组成为：重组人胰岛素15-20mg/mL、乳酸锌1-5mg/mL、L-茶氨酸45-50μg/mL、聚乙烯吡咯烷酮10-15mg/mL；

(3)取步骤(2)融合度达到85％-90％的细胞经胰酶消化后收集细胞，PBS清洗，对细胞进行匀浆处理，离心取上清液，将上清液经透析袋透析，取透析袋内的溶液冻干，即得骨髓间充质干细胞培养产物。

进一步地，所述凝胶基质为聚乙烯醇。

进一步地，步骤(2)中细胞接种浓度为1-2×10⁴个/mL。