[发明专利]一种基于干细胞培养上清的液体创可贴的制备方法

权利要求书

1.一种基于干细胞培养上清的液体创可贴，其特征在于，包括成膜液、活性物质和溶剂，所述成膜液包括壳聚糖盐酸盐、聚乙烯吡咯烷酮、透明质酸和硫酸软骨素，所述壳聚糖盐酸盐占2-10份、聚乙烯吡咯烷酮0.5-5份、透明质酸0.05-5份和硫酸软骨素0.05-5份，所述活性物质为干细胞培养上清冻干粉，所述溶剂为无菌水。

2.根据权利要求1所述的一种基于干细胞培养上清的液体创可贴，其特征在于，所述壳聚糖盐酸盐5份、聚乙烯吡咯烷酮2.5份、透明质酸2.5份和硫酸软骨素2.5份。

3.根据权利要求1所述的一种基于干细胞培养上清的液体创可贴，其特征在于，所述成膜液的制备方法，包括如下步骤：

1)称量6-10份壳聚糖盐酸盐加入到50份离心管中，加入50份无菌水，使其充分溶解得到壳聚糖盐酸盐溶液；将0.5-2份聚乙烯吡咯烷酮溶于20份无菌水中得到聚乙烯吡咯烷酮水溶液；

2)将步骤1)中的两种溶液混合，置于45-60℃恒温水浴锅中，1500-2000rpm机械搅拌混匀，然后降低搅拌速度为200-500rpm，混合液恒温控制在37℃，边搅拌边加2-5份硫酸软骨素、0.05-0.1份透明质酸，得到成膜液。

4.根据权利要求1所述的一种基于干细胞培养上清的液体创可贴，其特征在于，所述干细胞培养上清冻干粉的制备方法，包括如下步骤：

1)利用无血清培养基培养人脐带间充质干细胞，当细胞融合度达到85％-90％时，收集培养上清，使用新鲜的无血清培养基继续扩大培养，如此反复至细胞传代至第5代，收集全部培养上清；

2)将收集的全部培养上清反复冻融，进行细胞裂解后，低速离心，温度4℃，转速5000rpm，时间30min，去除碎片后，利用0.22μm滤膜过滤得到纯化的间充质干细胞培养上清；

3)向步骤2)中得到的纯化的间充质干细胞培养上清中添加0-5％人血白蛋白、0-10％海藻糖作为冻干保护剂、0-20％甘露醇作为赋形剂，混匀，得到冻干混合原液，置于-20℃冰箱中备用；

4)将步骤3)获得混合原液融化后分装至西林瓶中，置于-80℃冰箱中快速预冻2-5h后置于冷冻干燥机中进行冷冻干燥得到冻干粉成品。

5.一种基于干细胞培养上清的液体创可贴的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)用30份无菌水将干细胞培养上清冻干粉溶解为浓度0.5-20g/L的蛋白凝缩液；

2)将30份蛋白浓缩液，滴加入到上述成膜液中边加边搅拌，得到所述基于干细胞培养上清的液体创可贴，搅拌速度为400-1000rpm，搅拌温度为常温20-40℃。