[发明专利]阿尔茨海默病标志物p-Tau217检测试剂盒及其制造方法

说明书

本发明涉及荧光免疫层析技术领域，具体的说是一种灵敏度高、测试周期短的阿尔茨海默病标志物p‑Tau217检测试剂盒及其制造方法，其特征在于，其中结合垫上分别吸附有稀土荧光羧基微球标记的亲和素‑生物素化的p‑Tau217检测抗体复合物及荧光羧基微球‑鸡IgY复合物；包被膜上T线包被p‑Tau217捕获抗体、C线包被羊抗鸡IgY抗体；所述稀土荧光羧基微球的直径为200nm‑350nm，稀土荧光羧基微球掺杂稀土镧系元素，在基态下稳定，在340‑380nm的激发光源作用下发射出波长范围在600‑630nm的荧光；所述抗体为纯化后的单克隆抗体，来源于针对2‑6个不同的p‑Tau217抗原表位的单克隆抗体细胞株。

技术领域：

本发明涉及荧光免疫层析技术领域，具体的说是一种灵敏度高、测试周期短的阿尔茨海默病标志物p-Tau217检测试剂盒及其制造方法。

背景技术：

目前诊断阿尔茨海默氏病的方法包括：通过PET扫描测量淀粉样蛋白(一种与痴呆有关的蛋白质)的沉积；或使用腰椎穿刺术定量脑脊液中的淀粉样蛋白和tau蛋白。然而，PET扫描价格昂贵，仅在专门的医疗中心提供，目前尚不包括在保险范围内；而腰穿是侵入性的，并且不易在大量人群中进行。

随着基础医学的研究发现，通过检测血液中某种蛋白质水平，可以确诊阿尔茨海默病(俗称早老性痴呆症)，最早可在病症出现前 20年确诊。检测其中蛋白质p-Tau217水平有所增加，即能确诊阿尔茨海默病。在患者出现症状之前，其大脑和脊髓液中的p-Tau217水平已经增加。瑞典隆德大学研究人员发现，阿尔茨海默病患者 p-Tau217水平是未患病的人大约7倍。对于携带有一种罕见基因、先天易患阿尔茨海默病的人群，出现病症20年前血液中的p-Tau217 水平就开始增高。血液p-Tau217的诊断精度与已建立的诊断方法一样高，包括正电子发射断层扫描(PET)成像和脑脊液生物标志物，这些方法具有侵入性，成本高且易获得的缺点。

研究表明p-Tau217血液含量很低，健康群体血液浓度低于 1.9pg/mL，而携带相关基因突变，但是尚未出现认知功能损害的参与者其血液浓度达到4.5pg/mL，而出现认知功能损害的参与者该指标达到16.8pg/mL，差异非常显著。但是，要实现在快检平台实现该浓度检测的灵敏度，对检测技术是个很大的挑战。

免疫分析技术是利用微量抗原与相应的高特异性抗体之间的免疫反应，来检测如激素、药物、蛋白质、多肽、酶、肿瘤相关抗原、微生素、病毒、细菌及金属元素等生物体内活性物质。免疫分析技术包括标记免疫分析、非标记免疫分析和仪器免疫分析。本试剂盒利用的含有稀土元素的羧基微球标记免疫分析技术是属于标记免疫分析之一种。

荧光免疫分析(FIA)和放射免疫分析(RIA)自问世以来，经历了几十年的发展，但是人们越来越感觉到FIA因自然本地太高，干扰检测结果；RIA采用同位素标记，对人体有极大危害并给实验带来不便。酶免疫分析(EIA)也因酶本身不稳定，受其他影响因素较大，推广应用受到限制。80年代初，人们开始研究用稀土元素代替荧光物质和同位素标记蛋白质或抗体，将时间分辨技术引入到生物检测领域，建立了新型的超微量时间分辨荧光免疫分析技术(Time resolved Fluoroimmunoassay，简称TrFIA)。该技术采用多学科先进技术，集结了其他免疫分析的特点，在免疫学、分子生物学、细胞学和医学等领域，取得长足的发展和广泛应用。