[发明专利]一种从海参中提取岩藻聚糖硫酸硫酸酯和硫酸软骨素的方法

说明书

本发明提供一种从海参中同步提取岩藻聚糖硫酸硫酸酯和硫酸软骨素的方法，更有效的利用海参组织中岩藻聚糖硫酸酯和硫酸软骨素的结构和水溶性不同，完成海参中两种硫酸多糖的提取和分离。本发明方法具有提取条件温和、过程简便的优势，有效的从海参中将硫酸软骨素和岩藻聚糖硫酸酯进行提取和分离纯化；节省了海参中岩藻聚糖硫酸酯和硫酸软骨素的离子色谱分离、凝胶色谱纯化和脱盐等步骤，大大简化了海参中岩藻聚糖硫酸酯和硫酸软骨素的分离纯化工艺。本发明方法成本低廉、容易扩大、回收率高，是一种绿色环保的大规模制备海参岩藻聚糖硫酸酯和硫酸软骨素两种硫酸多糖纯品的方法。

技术领域

本发明属于分离纯化技术领域，具体涉及一种从海参中提取和分离岩藻聚糖硫酸硫酸酯和硫酸软骨素的方法。

背景技术

海参是棘皮动物门海参纲海参属生物，是一种富含蛋白、多糖、皂苷等活性物质的海珍品。海参体壁中富含硫酸多糖，主要是岩藻聚糖硫酸酯和岩藻糖基硫酸软骨素两种硫酸多糖组成。海参岩藻聚糖硫酸酯是岩藻糖以α1→3或α1→4键连接形成的直链大分子硫酸多糖，具有少量岩藻糖侧链，分子量一般都大于500-700kDa。海参硫酸软骨素是海参中特有的一种具有岩藻糖支链的硫酸软骨素，由葡萄糖醛酸和乙酰氨基半乳糖重复二糖单元组成，以β-1,4-和β-1,3糖苷键连接而成，乙酰氨基半乳糖和葡萄糖醛酸上有硫酸化的岩藻糖支链，分子量在80-120kDa。海参硫酸软骨素的硫酸根含量大于30％，远远高于岩藻聚糖硫酸酯，因此具有更好的抗凝血和抗血栓活性。

海参中岩藻聚糖硫酸酯和硫酸软骨素是两种结构和生物活性不同的硫酸多糖，因此需要分离纯化。目前采用的蛋白酶酶解、水提取的方法可以从海参中提取的海参硫酸多糖为岩藻聚糖硫酸酯和硫酸软骨素的混合物，因此还需要对两种硫酸多糖进行分离。目前，分离纯化岩藻聚糖硫酸酯和硫酸软骨素主要采用乙醇分级分离、盐分级分离、离子交换色谱法、双水相萃取和凝胶色谱柱层析法。而最常用的方法是阴离子交换柱层析法和双水相萃取法，这两种方法会混合大量的盐，除盐工作量大，而且阴离子柱价格昂贵。乙醇分级分离和盐分级分离海参硫酸多糖，分离效率比较低，产品纯度低。而凝胶色谱法每次处理的样品量太低，无法实现大规模生产。

发明内容

针对现有技术中海参岩藻聚糖硫酸酯和硫酸软骨素提取和分离纯化技术的不足，本发明提供一种从海参中同步提取岩藻聚糖硫酸硫酸酯和硫酸软骨素的方法，更有效的利用海参组织中岩藻聚糖硫酸酯和硫酸软骨素的结构和水溶性不同，完成海参中两种硫酸多糖的提取和分离。

本发明所提供的从海参中提取岩藻聚糖硫酸硫酸酯和硫酸软骨素的方法，包括如下的步骤：

1)海参预处理：

将海参进行组织破碎后加入蒸馏水进行浸提，浸提结束后进行离心，取沉淀待用；

所述的海参与水的质量比为1:5-1:10；

所述的蒸馏水进行浸提，是在30-50℃搅拌浸提30-60min。

2)水溶液提取和分离：

将步骤1)离心获得的沉淀中加入Tris-HCl水溶液进行提取，提取结束后离心，收集提取液和沉淀；

所述Tris-HCl水溶液，其一种实施例的具体记载是浓度为0.1-0.3mol/L，pH8.0，含有4mmol/L EDTA；

所述的提取，是在30-50℃缓慢搅拌提取12-24h；

3)将步骤2)获得的提取液真空浓缩后，加入氯化十六烷基吡啶进行沉淀，离心收集沉淀；沉淀溶解于添加了NaCl的醇溶液中；然后用90％乙醇水溶液进行沉淀、冷冻干燥后得海参岩藻聚糖硫酸酯干品；

所述的添加了NaCl的醇溶液，其一种是添加了3mol/L氯化钠的86％乙醇溶液；

所述的用于沉淀的乙醇水溶液，其一种是90％乙醇水溶液；