[发明专利]一种测定生物样品中芬太尼类药物的方法及试剂盒

说明书

本发明公开了一种测定生物样品中芬太尼类药物的方法及试剂盒，属于生物技术领域，具体步骤为：样品转入预先装有乙腈的离心管中进行振荡、提取、离心；再用净化萃取柱取样，样液在被吸取进入萃取柱时与净化剂充分接触，完成净化。取样结束后继续向上拉推杆，随后将滤膜安装在固相萃取柱底端并将推杆向下压使样液再次与净化剂发生接触，收集滤液，并进行液相色谱‑串联质谱检测分析；本发明相比于传统净化方法，操作更加简单、快速、高效，回收率高，无需氮吹浓缩和复溶等，非专业技术人员也能操作，可避免操作人员因专业经验不足引起的测定结果准确度和精密度低的问题。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种测定生物样品中芬太尼类药物的方法及试剂盒。

背景技术

芬太尼(fentanyl)是一种合成阿片类药物，于1960年由比利时科学家PaulJanseen首次合成，作为镇痛药出售，其镇痛效果为吗啡的80倍。芬太尼类药物为临床主要的麻醉用药，但药物剂量一旦过量，会导致呼吸抑制甚至死亡的危险。由于其强大的镇痛效果，芬太尼类物质被广泛使用，芬太尼非药用以及滥用的现象也随之出现。

芬太尼(及其衍生物)同阿片μ受体结合并具有高亲和力、高脂溶性和强内在活性。这些既是芬太尼的重要药理药效作用特点，但也是导致其致命的不良反应或毒性的主要原因，表现为同时具有强效镇痛效应和高滥用潜力，可快速透过细胞膜进入血脑屏障进入大脑，短时间形成血药高峰，极易形成耐受和药物依赖。芬太尼可通过皮肤、粘膜吸收，因此，此类物质中毒不但发生在滥用者中，而且可发生在无防护措施情况下芬太尼类药物处置或接触的工作人员中。

目前适用于对生物样品中芬太尼及其衍生药物进行初步筛选的分析方法多样，例如：免疫分析法、气相色谱-质谱、液相色谱-质谱(HPLC-MS/MS)方法等。免疫分析是利用抗原(靶标)和抗体的特异性结合来进行测定的一种方法，但不同的免疫分析法对芬太尼类似物的交叉反应具有局限性，且某些交叉反应是未知的；气相色谱-质谱方法不能直接测定非挥发性，极性或热不稳定性的物质，需要对目标物进行衍生化反应，与未来分析化学快速、高效的发展趋势不符。目前液相色谱-质谱方法作为最常用的检测手段，相比较于气相色谱-质谱方法来说，该技术灵敏度更高，更加稳定，而且适用范围更广，但非法和处方芬太尼类物质的液相色谱-质谱检测方法报道较少，导致处方芬太尼类药物的过量流行和非法芬太尼类药物的出现。因此，亟需一种可靠、快速、准确的分析检测方法，并将其应用于解决实际问题。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明目的是要提供一种测定生物样品中芬太尼类药物的方法及试剂盒。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种测定生物样品中芬太尼类药物的方法，采用HPLC-MS/MS测定生物样品中芬太尼类药物含量，具体包括以下步骤：

(1)样品预处理：将样品振荡离心后通过芬太尼类药物净化萃取管去除提取液中的共萃取杂质；

(2)HPLC-MS/MS检测：液相色谱采用0.1％甲酸-水溶液和0.1％甲酸-乙腈作为流动相；质谱采用电喷雾离子源正离子多反应监测模式检测。

进一步地，所述芬太尼类药物具体包括：乙酰芬太尼、异丁酰芬太尼、丙烯酰芬太尼、奥芬太尼、芬太尼、戊酰芬太尼和呋喃芬太尼。

进一步地，所述净化萃取管由混合净化剂、固相萃取柱、筛板、针筒推杆及滤膜组成。

进一步地，所述样品包括全血、唾液和尿液样品。

进一步地，步骤(1)所述混合净化剂各组分及用量为27mg C18吸附剂、29mg EMR(Bond Elut EMR-Lipid增强型脂质去除剂)、143mg NH₂(氨丙基萃取吸附剂)、100mg PSA(N-丙基乙二胺固相吸附剂)、100mg碱性硅藻土以及100mg碱性氧化铝。