[发明专利]一种基于叠氮炔环加成和电化学调控原子转移自由基聚合的卡那霉素电化学检测方法

权利要求书

1.一种基于叠氮炔环加成和电化学调控原子转移自由基聚合的卡那霉素电化学检测方法，其检测原理为：将修饰N₃基团的卡那霉素发卡样适配体固定在金电极表面，卡那霉素出现时会引起适配体构象的改变导致N₃远离电极表面，在Cu⁺催化下与溴代异丁酸丙炔酯PBIB发生叠氮炔环加成反应，随后大量FMMA通过eATRP连接聚合在展开的发卡适配体末端，最终经方波伏安法SWV测定电流强度与卡那霉素浓度呈正相关，绘制电化学信号与卡那霉素浓度之间的标准曲线得到线性方程，测量待测样品的电化学信号通过计算即可实现卡那霉素的灵敏检测。

2.根据权利要求1所述的一种基于叠氮炔环加成和电化学调控原子转移自由基聚合的卡那霉素电化学检测方法，其中发卡DNA预处理的步骤如下：卡那霉素DNA适配体粉末溶解在10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH＝7.4的TE溶液中并在95℃加热15min，然后缓慢冷却至室温。

3.根据权利要求1所述的一种基于叠氮炔环加成和电化学调控原子转移自由基聚合的卡那霉素电化学检测方法，其中金电极预处理的步骤如下：用800目、1000目、2000目及5000目砂纸打磨金电极各3-5min；然后用0.3μm和0.05μm的氧化铝悬浮液分别抛光裸露的金电极，再依次用99.99％的乙醇和超净水进行超声清洗；再将所处理过的金电极浸泡在新制备的水虎鱼溶液中10min；之后将电极放在0.5M H₂SO₄中用循环伏安法在-0.2-1.5V的电位范围内以0.1Vs^-1的扫速进行电化学处理，直至获得稳定的循环伏安图；最后用超净水冲洗电极表面，并用氮气吹干。

4.根据权利要求1所述的一种基于叠氮炔环加成和电化学调控原子转移自由基聚合的卡那霉素电化学检测方法，其中金电极修饰的步骤如下：将10μL 1μM于权利要求书2形成的含巯基发卡DNA滴加到干净的金电极上并在37℃下孵育1.5h；然后金电极用TE缓冲溶液冲洗两次；随后将金电极浸泡在2mM溶解于70％的酒精的MCH溶液0.5h；再用TE缓冲液冲洗电极；最后将10μL 100ng/mL的卡那霉素滴加在金电极表面并于37℃孵育1.5h。

5.根据权利要求1所述的一种基于叠氮炔环加成和电化学调控原子转移自由基聚合的卡那霉素电化学检测方法，其中进行点击反应的步骤如下：将修饰后的金电极浸泡在含10μL 4mM PBIB、10μL 4mM CuSO₄、10μL 8mM AA和370μL蒸馏水的点击反应溶液中并在37℃下避光孵育40min。

6.根据权利要求1所述的一种基于叠氮炔环加成和电化学调控原子转移自由基聚合的卡那霉素电化学检测方法，其中进行eATRP的步骤如下：将进行权利要求5后所得的金电极用TE溶液冲洗十秒；随后放入含有50μL 10mM FMMA、50μL 10mM Cu²⁺/Me₆TREN、500μL 1MKBr、900μL DMF和3500μL 0.1mM KPF₆的溶液中，并在其表面施加一个恒定的负电位-0.53V反应40min；再用线性伏安扫描法LSV扫描以去除沉积在电极表面的铜，其设置为：初始电位0V；最终电位0.2V；扫描速率1.0Vs^-1；最后用DMF和超纯水清洗电极。

7.根据权利要求1所述的一种基于叠氮炔环加成和电化学调控原子转移自由基聚合的卡那霉素电化学检测方法，其中电化学测定的步骤如下：将进行权利要求6后所得的金电极放入1.0M LiClO₄溶液中并用方波伏安法对电极表面从头合成的电活性聚合物进行检测，其设置为：初始电位0V，终止电位0.6V，电位增量4.0mV，脉冲幅值25mV，频率15Hz。