[发明专利]一种胃蛋白酶原I和胃蛋白酶原II联合定量检测试纸的制备方法及其检测方法

说明书

本发明公开一种胃蛋白酶原I和胃蛋白酶原II联合定量检测试纸的制备方法及其检测方法，包括以下步骤：步骤一：制备羧基修饰石墨烯/InP/CdS量子点：a.制备InP量子点溶液；b.配制巯基乙酸修饰镉盐前体溶液；c.制备羧基修饰石墨烯/InP/CdS量子点溶液；步骤二：制备样品垫；步骤三：制备标记垫：a.活化量子点溶液；b.制备复合抗体量子点标记液；c.制备标记垫：将标记液直接喷涂于玻璃纤维素膜上，喷膜浓度为2.5μl/cm，于37℃烘干，得到标记垫；步骤四：制备抗体包被的划线NC膜；步骤五：组装检测试纸。本发明首次利用羧基修饰量子点标记抗体，量子点表面大量的羧基与抗体中氨基反应，通过肽键的形式使二者稳定连接，最大限度地带动标记量，提高其灵敏度。

技术领域

本发明属于量子点免疫层析检测技术领域，具体涉及一种胃蛋白酶原I和胃蛋白酶原II联合定量检测试纸的制备方法及其检测方法。

背景技术

胃蛋白酶原始胃液中胃蛋白酶的无活性前体，由胃体的主细胞和黏液细胞分泌，大部分分泌到胃腔，少量可在血液中被检测到。根据其生化性质和免疫原性将其分成2个亚群，1-5组分的免疫原性相同，称为胃蛋白酶原I，主要由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌；组分6和7被称为胃蛋白酶原II，除由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌外，贲门腺和胃窦的幽门腺的黏液颈细胞以及十二指肠上段也能产生胃蛋白酶原II。血清和血浆中胃蛋白酶原I和胃蛋白酶原II比值的降低与胃体萎缩的严重程度呈正相关，中、重度萎缩性胃炎时，其比值为＜0.3，其胃癌的发病率显著增加，因此，联合测定胃蛋白酶原I核胃蛋白酶原II比值可起到早期胃癌风险提示的作用，通过其血清测量值的不同，在各胃部疾病中均有不同程度的改变，为临床提供可靠的诊断价值。

目前临床胃部疾病及胃癌的检测方法主要包括内窥镜、B超、X线检测、肿瘤标志物等。X线作为传统的胃癌检测手段，对进展期胃癌或弥散型胃癌更有诊断价值，但此法存在射线暴露，检查费用较高等问题，而且对早期胃癌的判定显得无能为力；内窥镜费用较高，对操作人员的技术要求高，而且下胃镜又令患者很痛苦，结果使不少患者望而却步，对亚临床症状患者尚不能作为普查手段；与胃癌有关的肿瘤标志物对于普通胃病及早期胃癌的诊断价值不大。目前已建立多种检测方法，如酶联免疫法、化学发光法、免疫比浊法等，酶联免疫吸附法检测精确，能准确定量，具有很高的敏感性，但是检测样品需要加样、温浴、洗涤、显色、终止等步骤，操作程序繁琐，耗时长，样品从处理到得到结论需要至少40分钟，不适合大规模的体检筛查，样品检测需要洗板机和酶标仪，携带不便，因而不能在病人家庭或急救车上进行检测，另外其敏感性、特异性不够高，对低浓度样品检测的准确度不高。而化学发光免疫测定，虽然精确度高，检测速度快，但检测需要昂贵的化学发光免疫分析仪，要求特定的分析室，且其试剂成本也较高,无法广泛用于较基层的意愿和医疗机构中。相比其他胃部检测手段,血清PGI/PGII联合检测具有无创伤、简便、可靠和费用低廉等优点，荧光免疫层析法相比酶联免疫吸附法和化学发光免疫测定，检测灵敏度高、准确度高、操作简便、成本低，因而具有更大的产业价值。

量子点(简称QDs，又称半导体纳米粒子)是由II～VI族或III～V族元素组成的，半径小于或接近于激光波尔半径，能够接受激发光产生荧光的一类半导体纳米颗粒，其中研究较多的主要是CdX(x＝S、Se、Te)，直径约为2nm～6nm，存在显著的量子尺寸效应和表面效应，荧光强度高，激发光谱宽，发射光谱较窄且呈对称分布使得量子点可以用于多种组分的多色标记，实现多组份同步检测，但现有技术，主要通过将量子点或量子点与高聚物的复合物和抗体直接混合，进行标记，标记稳定性差，抗体有效标记量低，致使量子点荧光标记的精密度有待进一步提高。如申请号为CN201610327064.1的专利，公开一种胃功能检测用免疫层析试剂盒及其制备方法，利用量子点-改性环糊精-胶乳复合物悬浊液标记胃蛋白酶原I抗体。

发明内容

针对现有技术的不足之处，本发明的目的在于提供一种胃蛋白酶原I和胃蛋白酶原II联合定量检测试纸的制备方法及其检测方法。

本发明的技术方案概述如下：