[发明专利]检测H5N1甲型流感病毒血凝素的方法

权利要求书

1.检测H5N1甲型流感病毒血凝素的方法，其特征在于包括以下步骤:

(1)采用表面配体交换法，使用聚丙烯酸对稀土掺杂上转换发光纳米颗粒进行水溶性修饰；

(2)采用缩合反应，完成H5N1 HA核酸适配体在步骤(1)获得的纳米颗粒表面的偶联，得到上转换荧光探针；

(3)取100～200μg上转换荧光探针分散在100～200μl、pH＝7.8的硼酸盐缓冲液中；分别加入已知的不同终浓度的H5N1 HA标准品，在20～40℃孵育20～60分钟，分别加入终浓度为50～300μg/ml的氧化石墨烯，20～40℃孵育20分钟，用pH＝7.8的硼酸盐缓冲液定容至300μl，分别测定980nm激发波长时542nm发射波长的荧光值F，同时测定空白荧光值F₀，作出相对荧光强度[(F-F₀)/F₀]与H5N1 HA浓度对应的标准曲线；

(4)制备待测样品的检测体系，测定待测样品的相对荧光强度；根据所述标准曲线得到待测样品中H5N1 HA的浓度；

H5N1 HA为H5N1甲型流感病毒血凝素的缩写；

所述H5N1 HA核酸适配体为5′-NH_2-TTGGGGTTATTTGGGAGGGCGGGGGTT-3′所示，其中的核苷酸序列用SEQ ID No.1所示。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征是所述稀土掺杂上转换发光纳米颗粒的颗径为17～20nm。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征是所述氧化石墨烯的片径为0.5nm～2μm。