[发明专利]一种跨膜表达新型冠状病毒抗原的细胞的制备方法、细胞和应用有效
申请号: | 202011102574.1 | 申请日: | 2020-10-15 |
公开(公告)号: | CN112251413B | 公开(公告)日: | 2021-05-14 |
发明(设计)人: | 焦顺昌;张嵘;袁翰;张艳玲;李斯慧;冯向辉;宋文静;吕鹏敏;钟宏东;胡坤 | 申请(专利权)人: | 焦顺昌;北京鼎成肽源生物技术有限公司 |
主分类号: | C12N5/10 | 分类号: | C12N5/10;C12N15/85;C12N15/50;A61K39/215;A61P31/14 |
代理公司: | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人: | 吕纪涛 |
地址: | 102200 北京市昌平区双*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 表达 新型 冠状病毒 抗原 细胞 制备 方法 应用 | ||
1.一种跨膜表达新型冠状病毒抗原的细胞的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)将序列通过Bsu36I和BmgBI双酶切位点整合到质粒中,得到PB-S-RBD-NGFR质粒;所述序列的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示;
2)将所述步骤1)得到的PB-S-RBD-NGFR质粒电转化到K562细胞中,经嘌呤霉素筛选,当活细胞比例持续大于80%时,得到跨膜表达新型冠状病毒抗原的细胞。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤2)嘌呤霉素筛选时的使用浓度为5μg/ml。
3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤2)电转化的条件包括:560V、30ms。
4.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤2)PB-S-RBD-NGFR质粒的质量与K562细胞的数量比为10μg:1×107cells。
5.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤2)筛选的时间在7d以上。
6.一种基于权利要求1~5任一项所述的制备方法制备得到的跨膜表达新型冠状病毒抗原的细胞,所述细胞的细胞膜上表达信号肽、新型冠状病毒刺突糖蛋白的受体结合结构域和跨膜蛋白结构域;
所述信号肽的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示,所述新型冠状病毒刺突糖蛋白的受体
结合结构域的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示,所述跨膜蛋白结构域的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。
7.根据权利要求6所述的细胞,其特征在于,编码信号肽的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。
8.据权利要求6所述的细胞,其特征在于,编码新型冠状病毒刺突糖蛋白的受体结合结构域的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。
9.据权利要求6所述的细胞,其特征在于,编码跨膜蛋白结构域的核苷酸序列如SEQ IDNo.7所示。
10.权利要求6~9任一项所述的细胞在制备新型冠状病毒抗体中的应用。
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